牙乳头细胞作为牙胚发育过程中唯一具有分化为成牙本质细胞的间充质细胞群体，在牙齿形成特别是牙本质形成过程中，扮演着重要的调节作用，受到口腔医学研究者的高度重视。国外学者利用小鼠下颌磨牙牙胚已成功地进行了牙乳头细胞体外培养并有建株成功的报道，有关人牙乳头细胞体外培养的研究则报道极少。已知许多激素和生长因子参与牙胚的发育过程，对牙髓细胞的增殖、分化有一定的调节作用，但对牙乳头细胞影响的研究甚少。钙结合蛋白在牙齿中的分布近年来受到关注，但在人牙胚中是如何分布的迄今未见报道。本研究围绕上述问题，利用现代组织细胞培养、放射免疫测定、原位杂交等技术手段，首先建立可稳定传代的人牙乳头细胞体外培养模型，并在此基础上，观察有关激素和生长因子对该细胞生长增殖、功能分化等生物学特性的影响。对人牙胚和牙乳头细胞中是否有钙结合蛋白—Calbindin-D28k基因表达进行了观察研究。 1 人牙乳头细胞体外培养模型的建立 利用从临床获得的合法水囊引产胎儿，胎龄4～6个月，获取其牙乳头组织，采用组织块法在DMEM和RPMI1640两种培养基中进行体外培养，并进行较系统的研究。结果显示：人牙乳头细胞易于从组织块中游出，原代培养成功率较一般人牙髓细胞、牙周膜细胞为高。细胞在形态上为成纤维细胞样，呈短梭形和星形，扫描电镜下见细胞表面有一些微突起，透射电镜下见细胞浆内有些微丝，核为不规则形。免疫组织化学染色角蛋白、肌动蛋白、α-平滑肌蛋白、胶质纤维蛋白、神经纤维蛋白和骨形成蛋白为阴性，波形丝蛋白、纤维粘连蛋白和EGF受体为阳性，证实为间充质来源的细胞。7种常用凝集素组织化学染色显示ConA、WGA和RCA阳性，余为阴性。细胞可稳定连续传代，冻存和复苏对细胞形态、生长状态和活性无明显影响。染色体核型分析显示细胞保持了正常人的染色体组型，为二倍体细胞。