【摘 要】
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溞类在维护淡水生态系统食物链的完整性和可持续性方面发挥了重要作用。为制备能识别这类或这类其中某种生物的几丁质酶抗体,本文通过RT-PCR和RACE技术成功从隆线溞和老年低
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溞类在维护淡水生态系统食物链的完整性和可持续性方面发挥了重要作用。为制备能识别这类或这类其中某种生物的几丁质酶抗体,本文通过RT-PCR和RACE技术成功从隆线溞和老年低额溞体内扩增得到了几丁质酶(Chitinase)cDNA的全长序列。隆线溞几丁质酶cDNA全长1404 bp,编码383个氨基酸;老年低额溞几丁质酶cDNA全长1319bp,编码382个氨基酸。在获得全长序列的基础上,我们以基因组DNA为模板,得到两种生物几丁质酶所对应基因组基因的结构。隆线溞几丁质酶对应基因组基因由2个内含子和3个外显子构成,而老年低额溞由3个内含子和4个外显子构成。据推导得到的两种几丁质酶蛋白序列,与多种水体中存在的生物几丁质酶蛋白序列进行比对,我们设计了四条针对溞类的多肽,分别是ADHHAPLRKRS,GRQEPWQFGVENV,KRSFETTDNNVEYS,WEYPRSEADKTGF。以合成的人工多肽作为抗原免疫新西兰白兔,成功制备了兔抗隆线溞几丁质酶多克隆抗血清,经过纯化得到四种抗体分别命名为001、002、003、004抗体。在抗体的特异性研究中,我们提取隆线溞、老年低额溞、中华薄壳介、锯缘真剑水蚤、米虾、花翅摇蚊六种生物体内粗酶液和各生物水中游离酶液进行了交叉反应,结果显示003抗体能更好的识别溞类体内和水中游离的几丁质酶液,并且与其他生物交叉反应很低(低于6%)。因此本文制备的003抗体可应用于水体检测溞类的种群变化。
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