微生物油脂是一种新型产油资源。由于微生物生长周期短,普遍含有多种脂肪酸,现已在生物燃料能源、水产饵料及饲料添加剂方面有多种应用,部分富含人体必须不饱和脂肪酸的油脂微生物在孕妇补品、婴儿食品等方面都有涉及应用。而发酵法生产微生物油脂在技术上已经完全可行,关键在于是否有合适生产的微生物源。因此本文以真菌油脂微生物为研究对象,力图筛选出适应工业化大批量生产不饱和脂肪酸的产油微生物,并对其进行诱变育种以提高油脂产量,为油脂微生物资源库提供高产油可选菌株。主要研究内容如下:(1)对实验室获得的74株真菌微生物根据是否产油、产油量、油脂组分及生物量四个指标进行筛选。通过尼罗红荧光染色法初步确定56株产油量较高的菌株,并对筛选出的菌株进行生物量、产油量与油脂组分测定,最终筛选出一株高产油且脂肪酸构成比例优良的产油菌株红冬孢酵母4-Rhodosporidium.sp。其中,4-Rhodosporidium.sp的生物量大,高达5.187g/L,且油脂组分中不饱和脂肪酸种类较为丰富(亚油酸-C18:2n6c含量30.69%、γ-亚麻酸-C18:3n6含量5.59%、DHA-C22:6ns 含量 1.26%、EPA-C20:51.6%)。(2)对筛选出来的红冬孢酵母4-Rhodosporidium.5p进行紫外诱变,探究了该菌株对紫外辐照时间的敏感度,做出致死率曲线,选择诱变时间70 s且致死率为76.3%的紫外光进行辐照。对诱变后存活下来的菌株进行发酵处理,并通过香草醛染色法快速检测微生物油脂含量,筛选出油脂含量高的诱变菌株4-Rhodosporidium.sp-N07。(3)为了提高诱变菌株4-Rhodosporidium.s-N07的产油效率,采用单因素试验法和响应面法对4-Rhodosporidium.s-N07进行发酵条件优化,考察不同温度、pH、摇床转速、接种量对其发酵产油的影响。结果显示对酵母含油量的影响大小的因素分别为温度>转速>接种量>pH。在单因素实验结果的基础上进行响应面试验,以含油量为响应值,采取多元二次回归方程进行拟合,得出本酵母发酵的最优条件为:温度24.09℃,pH=6.78,转速为183.66 r/min,接种量为11.75%,此时含油量高达64.9084%。在此预测条件下进行Rhodosporidium.s-N07发酵培养测定含油量的验证实验,经过三次平行实验,该酵母中油脂含量平均值为61.43%±0.327%,与预测值较为接近,说明响应面优化法能够比较真实地反映各因子对4-Rhodosporidium.s-N07产油量的影响,能够较好地模拟和预测其产油量,得出最佳发酵条件。