刚地弓形虫是一种专性胞内寄生原虫,可感染包括野生哺乳动物、鸟类、牲畜、家禽和人类在内的多种宿主,是一种危害严重的食源性人畜共患病病原。人类和其他温血动物作为弓形虫的中间宿主,可以通过摄入孢子化卵囊,以及含有包囊的动物组织而感染弓形虫。免疫力正常的成年人感染弓形虫后一般不表现出明显临床症状,孕妇在感染弓形虫后可能会出现流产。猪是弓形虫的易感宿主之一,急性感染的猪会出现高热、咳嗽、呼吸困难、运动障碍以及神经症状等。妊娠母猪感染弓形虫后可通过垂直传播,经胎盘感染胎儿,导致母猪流产、早产、产死胎或者畸形胎,且死亡率较高。中国作为生猪养殖大国,规模化养殖场较多,猪弓形虫病危害严重。因此,建立一种快速准确地检测方法是防控猪弓形虫病流行的重要措施之一。目前,猪弓形虫病的检测主要是依靠血清学方法,酶联免疫吸附试验（ELISA）是最常见的血清学检测方法之一。弓形虫的膜表面蛋白1（SAG1）是弓形虫速殖子期的特异性抗原,具有强免疫原性特征,是弓形虫诊断和疫苗研究的重要候选靶标分子。本研究首先筛选了弓形虫适于表达的表面抗原SAG1序列（截短）,构建了p GEX-6p-SAG1原核表达质粒,表达并纯化了重组的SAG1蛋白。经鉴定重组的SAG1蛋白大小约为54 k Da,通过Western Blot证实重组的SAG1蛋白能被猪弓形虫阳性血清特异性识别,随后,我们利用该重组蛋白建立一种检测猪的血清内弓形虫抗体的ELISA方法。为了更好的提高ELISA检测方法的敏感性和准确性,我们对ELISA方法的反应条件进行了优化,通过P/N值确定了ELISA检测方法的最佳反应条件:SAG1抗原最佳包被量为1μg/m L;抗原最佳包被液为0.05 M碳酸盐缓冲液;最佳封闭时间为60min;抗体的最佳稀释液为3%脱脂奶溶液,稀释度分别为一抗1:100,二抗1:4,000;抗体最佳孵育时间为60 min;底物最佳显色时间为20 min;结果最佳判定条件为当OD450nm值＞0.56,判为阳性;OD450nm值≤0.56,判为阴性。通过与免疫印迹、间接免疫荧光检测的方法对ELISA检测结果进行对比验证,检测结果与间接ELISA（Ig G）检测方法均具有较高的符合率和特异性,表明该检测方法可用于猪弓形虫病的临床诊断,SAG1可作为一种具有很好诊断价值的弓形虫病诊断抗原。利用建立的ELISA检测方法对山东省14个地区收集的共1,170份猪的血清样品进行血清学调查,结果显示山东省不同地区猪弓形虫病平均阳性率为20.85%,其中244份样品检测结果呈阳性。在山东省14个不同地区的发病率在15.63%到22.98%之间,且差异显著。在猪的不同种群中,妊娠母猪阳性率最高（25.7%）,其次是繁殖公猪（22.7%）、后备母猪（21.1%）、育肥猪（18.3%）和仔猪（17.1%）,母猪感染弓形虫的阳性率明显高于其他猪。不同的饲养规模和养殖条件也是猪弓形虫病阳性率的决定性因素,其中包括散养户（25.8%）、大型养殖场（15.2%）和小型养殖场（22.7%）。目前的调查结果显示在山东部分地区养殖场内存在猪弓形虫病较高的流行率态势,这可能与山东省不同地区的温度、湿度、地理位置、猪场的饲养条件,养殖环境、猪的年龄种群等有着密切的关系。综上所述,本研究建立了一种适用于猪弓形虫病检测的ELISA方法,并利用该方法对山东不同地区猪场收集的血清样品进行血清学Ig G抗体检测,其中猪弓形虫病较高的流行率可能与猪场的地理位置、养殖环境等相关。上述试验结果可用于了解山东地区猪弓形虫病的流行情况,为山东省猪弓形虫血清流行病学研究提供了信息,有助于猪弓形虫病防控的策略的制定。