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背景和目的:血吸虫病是一种流行于热带和亚热带地区的疾病,目前全世界超过2.4亿人感染血吸虫,且每年导致约500,000至800,000患者死亡。血吸虫感染后导致患者出现肝纤维化、门静脉高压、肝腹水和静脉曲张破裂进而导致上消化道大出血等严重的病理反应,而巨噬细胞极化在其形成过程中发挥着重要作用。本课题前期发现日本血吸虫体表非特异性结合的多肽ZLW有一定的抗血吸虫效果。因此,本研究通过分析多肽ZLW调控宿主巨噬细胞极化偏移,研究其改善肝纤维化的效果,并初步探索其作用机制。方法:(1)用PSIPRED、NetNGlyc 1.0、DISPHOS、ClustalW等软件分析ZLW的结构特点及功能;(2)分别用0.1、1、10、100、1000μg/ml的ZLW刺激RAW264.7细胞后,选取CD11b、F4/80、CD86、CD206作为巨噬细胞标记物,通过流式细胞技术分析ZLW对RAW264.7细胞极化偏移干预效应;(3)小鼠随机分为未感染+NC组、感染+NC组、感染+ZLW组后,将感染+NC组及感染+ZLW组小鼠通过腹腔表皮感染日本血吸虫尾蚴。感染后,未感染+NC组和感染+NC组小鼠每日注射100μl 0.9%的生理盐水,感染+ZLW组小鼠每日注射100μl 100μg的多肽ZLW;(4)分别在第3d、24d、33d、42d、49d分离各组小鼠的肝脏和脾脏巨噬细胞后,选取CD11b、F4/80为巨噬细胞标记物、CD86为M1巨噬细胞标记物、CD206为M2巨噬细胞标记物,通过流式细胞技术检测M1和M2比例变化;(5)分别在第3d、24d、33d、42d、49d取各组小鼠肝脏组织,通过H&E和Masson染色检测肝脏组织病理变化;(6)分别在第3d、24d、33d、42d、49d取各组小鼠肝脏组织,选取CD68为总巨噬细胞标记物、iNOS作为M1型巨噬细胞标记物、CD206和Arg1作为M2型巨噬细胞标记物,通过IHC染色确定肝脏组织中巨噬细胞的定性及定位分析;(7)分别在第3d、24d、33d、42d、49d将小鼠眼球取血,通过ELISA法检测血清中IL-6、TNF-α表达变化。结果:(1)多肽ZLW是长为39个氨基酸残基的多肽,富含多个磷酸化位点,且与鼠Zfp36l2蛋白存在高度同源性。(2)流式细胞技术检测发现,当多肽ZLW作用RAW264.7细胞的终浓度为100μg/ml时,M1巨噬细胞达到最大值50.73%,而M2巨噬细胞占比达到较小值3.28%。(3)流式细胞技术检测显示,多肽ZLW作用后,感染+ZLW组小鼠肝脏中M2/M1比例在第24天时最高,在第49天降到最低值,且均显著低于未感染+NC组和感染+NC组;脾脏中M2/M1比例在第33天时最高,在第42天后M2/M1比例接近于未感染+NC组,且均与感染+NC组存在显著性差异(P<0.01)。(4)H&E和Masson染色分析发现,感染+ZLW组小鼠肝脏组织病变程度和炎症细胞浸润现象明显减轻且纤维结缔组织增生明显减少。(5)IHC结果显示,感染+NC组及感染+ZLW组小鼠肝脏组织中CD68~+细胞明显增多;感染+ZLW组小鼠肝脏组织中CD206~+细胞相比感染+NC组明显有所减少;感染+ZLW组第42天的肝细胞胞浆中iNOS表达明显增加,而Arg1表达明显下降。(6)ELISA法检测第3、24、33、42、49天各组小鼠外周血血清发现,在各检测时间点感染+ZLW组IL-6浓度分别平均低于感染+NC组1.11、1.87、1.64、1.61、1.37倍,且均存在显著性差异(P<0.05);在各检测时间点感染+ZLW组TNF-α浓度分别平均高于感染+NC组1.05、1.57、1.44、1.52、2.79倍,除第3d外,均存在显著性差异(P<0.05)。结论:(1)多肽ZLW能诱导小鼠肝脏和脾脏巨噬细胞M1极化,且抑制M2极化;(2)多肽ZLW可通过调节精氨酸代谢进而影响小鼠肝脏巨噬细胞极化;(3)多肽ZLW可以改善血吸虫病肝纤维化的进程。