人肝癌细胞总RNA电转染树突状细胞的抗肿瘤研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Layman_Zhejiang
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目的:探讨人肝癌细胞总RNA电转染人树突状细胞(Dendritic Cell,DC)后能否诱导出特异性的效应T细胞;观察电转染前后和成熟前后的树突状细胞表面形态学及蛋白表达变化;分析人肝癌细胞总RNA电转染树突状细胞并诱导特异性的效应T细胞抗人肝癌的特异性,为树突状细胞抗肿瘤的临床应用提供理论基础。 方法:通过密度梯度离心法分离人外周血的单核细胞,采用细胞因子体外培养诱导其分化为未成熟树突状细胞(Immature Dendritic Cell,imDC)和成熟树突状细胞(Mature Dendritic Cell,mDC)。采用Wright-Gimsa染色、免疫细胞化学、酶细胞化学检测、光学显微镜、倒置显微镜、透射电子显微镜和扫描电子显微镜观察单核细胞、未成熟树突状细胞、成熟树突状细胞形态及其表面标志等。 培养人肝癌细胞株Bel-7402,采用Wright-Gimsa染色、倒置显微镜、免疫细胞化学观察人肝癌细胞形态及其表面标志。Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA。检测其完整性和纯度。 通过电转染法将人肝癌细胞总RNA导入未成熟树突状细胞内;观测电转染树突状细胞的转染率及台盼蓝检测电转24h后细胞的死亡率;电转染后的未成熟树突状细胞形态及其表面标志并与电转染前作比较。
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