论文部分内容阅读
目的阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)是中枢神经系统最常见的变性疾病之一，主要的病理特征有神经纤维缠结(neurofibrillary tangle, NFT)、老年斑形成(senileplaque，SP)和神经元缺失等。AD的病因不明，发病机制复杂，β淀粉样蛋白(β-amyloidprotein, Aβ)假说是目前普遍认可的假说，Aβ具有神经毒性，在AD病程中起着重要的作用。新近的研究表明Aβ还可导致细胞内蛋白激酶CK2异常表达,从而影响快速轴突转运功能。美金刚，作为NMDA受体拮抗剂主要用于治疗AD，具有明显的神经保护作用。本文通过对双侧海马立体定向注射Aβ25-35建立AD大鼠动物模型，腹腔灌胃给予美金刚进行药物干预，利用Morris水迷宫评定大鼠学习记忆能力，运用HE染色、Nissl染色观察大鼠海马组织形态改变及Western Blot方法检测蛋白激酶CK2ɑ蛋白表达。观察美金刚对AD大鼠认知功能改善情况，及其对AD大鼠蛋白激酶CK2ɑ表达的调控，以期更深入的阐述其作用机制。方法通过对双侧海马立体定向注射Aβ25-35建立AD大鼠动物模型。选用健康雄性Wistar大鼠48只，体重250g-300g，将其随机分成四组：假手术组（sham group，SHAM组），AD模型组（AD model group，AD组），美金刚高剂量组（memantine high dosegroup，MEN-H组），美金刚低剂量治疗组（memantine low dose group，MEN-L组）。用无菌生理盐水溶解Aβ25-35至浓度为2μg/μl，37℃孵育7d，致使Aβ25-35为聚集态。通过立体定向仪，分别向AD组，MEN-H组、MEN-L组大鼠的双侧海马注入凝聚态的Aβ25-352.5μl，向SHAM组大鼠的双侧海马注入等体积无菌生理盐水。MEN-L组和MEN-H组大鼠分别给予5mg/kg、20mg/kg美金刚灌胃，其余两组大鼠给予生理盐水灌胃。术后第10天，各组大鼠进行Morris水迷宫训练共5天，评估学习记忆能力。行为学测试结束后，将大鼠麻醉取脑，进行试验：HE染色及Nissl染色察看大鼠海马组织形态学变化，western blot法检测蛋白激酶CK2ɑ的表达。结果（1）水迷宫实验结果：AD组、MEN-H组和SHAM组相比，逃避潜伏期明显增加、时间比率减少、穿过平台次数明显减少（P均<0.05）；MEN-L组与AD组相比，逃避潜伏期明显减少、时间比率也明显增加、穿过平台次数明显增加（P均<0.05）；SHAM组与MEN-L组相比，逃避潜伏期、时间比率、穿过平台次数无明显差异（P均>0.05）。（2）HE染色及Nissl染色：SHAM组大鼠海马神经元结构完整，细胞核仁明显，染色均匀，尼氏小体丰富。AD模型组可观察到海马区神经元细胞数目减少且排列稀疏，细胞核固缩、染色较深，核仁偏移，胶质细胞增生，胞浆内尼氏小体减少。MEN-H组和MEN-L组海马神经元结构与SHAM组相似。（3）WB结果：AD组与SHAM组相比较，CK2表达增强（P<0.05）；MEN-H组、MEN-L组和AD组相比较，CK2表达减少（P<0.05）；MEN-H组、MEN-L组和SHAM组相比较，CK2表达增强（P<0.05）。结论（1）向Wistar大鼠双侧海马立体定向注射Aβ25-35能够成功建立AD动物模型；（2）Aβ25-35可导致神经细胞损伤、凋亡和蛋白激酶CK2α表达增高，导致大鼠学习记忆障碍；（3）美金刚能改善Aβ诱导的大鼠AD模型的学习记忆功能障碍，其机制可能与减少蛋白激酶CK2α表达有关。