鸭浆膜炎是由鸭疫里氏杆菌(Riemerella antipestifer RA)引起的一种雏鸭、雏鹅、雏火鸡以及野鸭等多种雏禽的一种传染性疾病，表现急性或慢性败血症，每年都会带来巨大的经济损失。RA为革兰氏阴性小杆菌，至今国际上公认的血清型有21种，各血清型之间并无显著的交叉保护，这就为免疫预防增加了难度。但是这21种血清型的外膜蛋白A基因上有一段高度保守的序列，并且具有一定的免疫原性，所以本实验就根据这段高度保守的基因序列建立了鸭疫里氏杆菌PCR快速诊断的方法，又表达了OmpA基因片断，以期为找到一种可以同时防治多种血清型RA的亚单位疫苗奠定一个基础。主要方法和结果如下： 参考GenBank中已发表的外膜蛋白A(Outer membrane protein A，OmpA)基因序列，在其高度保守区设计了一对特异性引物，成功地建立了鸭疫里氏杆菌的快速、准确检测方法。分离菌株均能扩增出394bp的特异性目的条带，而对鸭源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌和鸭源沙门氏菌的扩增结果均为阴性，该PCR方法能检测出的最低DNA的量为8pg。 参考GenBank中已发表的OmpA基因序列，设计合成了一对含酶切位点的引物，从鸭疫里氏杆菌培养物中抽提总DNA，PCR扩增出OmpA基因片段，长度为501bp，然后克隆进pMD18-T Siraple Vector，将测序正确的目的基因亚克隆入表达载体pET-32a(+)中，转化BL21(DE3)宿主菌，构建出重组表达质粒pET-OMPA，PCR和BamHI、．XhoⅠ酶切鉴定表明构建正确。IPT6诱导蛋白表达，SDS-PAGE电泳分析表明在相对分子质量38KDa左右处出现新的蛋白条带，经Western-Blot分析表明，该条带为目的基因在大肠杆菌中的表达，并且融合蛋白能够被鸭疫里氏杆菌阳性血清所识别，具有良好的反应原性。诱导浓度为1.5mmol/L，诱导起始时间为2h，诱导3h后表达量即达到高峰。