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本文采用溶剂热法合成了具有超顺磁性的Fe3O4亚微球(MSF),经环氧化、修饰亚氨基二乙酸(IDA),获得IDA修饰的Fe3O4亚微球(MSF-IDA),然后螯合系列过渡金属离子(Me),制备成超顺磁性Fe3O4亚微球金属螯合亲和介质(MSF-IDA-Me),用于带有六聚组氨酸标签(6×His-Tag)的枯草芽孢杆菌1-382氨基酸基因工程重组蛋白(His-1-382APR,kD值约为42)的吸附及分离能力的研究。对溶剂热法合成了具有超顺磁性的MSF进行直接环氧氯丙烷修饰,无复杂的聚合反应过程,然后连接IDA、螯合Me,经傅立叶红外吸收光谱(FT-IR)对MSF、MSF-IDA、MSF-IDA-Me进行表征分析,证明IDA成功修饰到环氧化MSF表面,FT-IR及电感耦合等离子体发光光谱分析(ICP)金属元素分析都证明Me成功地螯合到MSF-IDA上。滞磁回归曲线(VFM)表明MSF经IDA修饰及Me螯合对饱和磁化强度影响不大,仍保持有良好的磁响应性能。通过 MSF、MSF-IDA、MSF-IDA-Cu2+、MSF-IDA-Ni2+、MSF-IDA-Co2+、MSF-IDA-Zn2+对无 6×His-Tag 蛋白——牛血清蛋白(BSA)和His-1-382APR的吸附实验,对实验结果进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,表明MSF、MSF-IDA、MSF-IDA-Cu2+、MSF-IDA-Ni2+、MSF-IDA-Co2+、MSF-IDA-Zn2+对BSA无特异吸附作用;未螯合Me的MSF、MSF-IDA对His-1-382A PR也无特异吸附作用。对His-1-382A PR特异性吸附效果良好的是MSF-IDA-Cu2+、MSF-IDA-Ni2+、MSF-IDA-Co2+、MSF-IDA-Zn2+四种磁性亚微球金属螯合亲介质。对MSF-IDA-Me制备条件及His-1-382APR分离条件的优化研究表明,IDA修饰环氧化MSF最佳浓度为5%,NaHC03缓冲溶液最佳pH为9.5;螯合Me溶液浓度为0.1 mol/L即可达到饱和。实验表明,螯合不同Me对His-1-382APR的吸附能力不同,其负载 His-1-382A PR 的强弱能力顺序为:MSF-IDA-Cu2+>MSF-IDA-Ni2+>MSF-IDA-Co2+>MSF-IDA-Zn2+,其中 MSF-IDA-Cu2+、MSF-IDA-Ni2+吸附的 His-1-382A PR 难以洗脱,而 MSF-IDA-Co2+、MSF-IDA-Zn2+对His-1-382APR可以实现吸附-分离。对 MSF-IDA-Co2+、MSF-IDA-Zn2+两种介质对 His-1-382A PR 纯化反复使用性进行研究,目前商品化的His-1-382A PR纯化介质的载量一般在40mg/g左右,而且在使用6至7次对His-1-382APR的载量就降至30%以下,需要重新负载Me。MSF-IDA-Co2+、MSF-IDA-Zn2+对His-1-382APR的初次负载量超过100 mg/g,在使用6至7次后,对His-1-382A PR的载量依然为初次载量的80%以上,长时间储存后,经过重新负载Co2+或Zn2+,对His-1-382APR的载量也没有明显降低。MSF-IDA-Co2+、MSF-IDA-Zn2+对 His-1-382A PR的纯化效果远高于目前商品化的6×His-Tag蛋白纯化介质。