【摘 要】
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本文采用锚定引物法构建特异性的贾第虫cDNA文库。初步测序的结果表明，文库中目标序列得到很好的富集，大大提高了发现新的小分子RNA的效率。由于部分克隆重复出现，需要采用有效
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本文采用锚定引物法构建特异性的贾第虫cDNA文库。初步测序的结果表明，文库中目标序列得到很好的富集，大大提高了发现新的小分子RNA的效率。由于部分克隆重复出现，需要采用有效的方法进行文库筛选。在菌落PCR初筛的基础上，改进以前的筛选方法，用PCR法标记产生探针，然后直接与PCR产物点阵膜杂交。经过优化筛选条件，该方法准确率达到90％，可以在短时间内对文库进行大量筛选。
本文经过大规模的文库筛选和测序分析，在贾第虫中共获得16种具有boxC/DsnoRNA特征的小分子RNA，称之为boxC/DsRNA。此外，在文库中还发现一具有boxH/ACAsnoRNA结构特征的cDNA序列，推测其属于boxH/ACAsRNA。northern杂交的结果证明它们都是贾第虫细胞中稳定存在的分子。
本文是国际上首次通过构建cDNA文库对贾第虫sRNA进行系统研究，为原始真核生物中snoRNA的深入研究提供了丰富的材料，纠正了先前关于原始真核生物snoRNA的一些片面认识：对boxC/DsnoRNA的结构和功能分析表明，双功能boxC/DsnoRNA不是原始真核生物具有的普遍现象；对boxH/ACAsRNA的结构分析证明，早期的真核生物已经存在boxH/ACAsRNA的双环结构。通过比较各种生物中snoRNA的结构、功能和基因组织特点，推测snoRNA可能具有不同的进化方向。
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