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肝纤维化是肝脏损伤后的病理性修复反应,其特征是肝脏中肝星状细胞(hepatic Stellacells,HSCs)激活、增殖和细胞外基质蛋白过度沉积,本研究检测了叶酸摄取相关基因在原代HSCs活化过程中的mRNA表达,发现Folr1基因的表达在HSC活化过程中持续性增强,而Slc19a1和Slc46a1的表达则表现出下降趋势,这表明FR-α在HSCs摄取叶酸方面占据主导作用;叶酸是人体自身不能合成的必需物质,在细胞的生长、分化、损伤修复等方面起着重要作用。叶酸缺乏可影响多种细胞的增殖、凋亡和侵袭以及细胞表型改变。HSCs的活化是肝纤维化的关键,本研究采用不同浓度叶酸(Omg/L叶酸缺乏组、1 mg/L中浓度组、5mg/L高浓度组)处理HSC-T6细胞,研究叶酸对HSC-T6细胞的作用,探索叶酸能否抑制HSCs活化或者逆转已活化HSCs至静息态。首先,通过CCK-8实验,观察到叶酸缺乏可以抑制HSC-T6细胞的生长;BrdU,AO/PI双染色和流式细胞仪检测细胞凋亡实验结果显示叶酸缺乏抑制HSC-T6细胞生长是通过抑制HSC-T6细胞增殖和促进HSC-T6细胞凋亡实现的。细胞划痕实验显示:叶酸缺乏可以抑制HSC-T6细胞迁移,这表明叶酸参与调控T6细胞的表型改变。其次,通过QPCR和Western blotting实验,本研究发现叶酸缺乏作用下HSC-T6细胞内p-ERK1/2的表达显著低于中浓度组和高浓度组,而ERK1/2的表达无显著差异,这表明叶酸缺乏可通过下调ERK1/2途径中p-ER1/2的表达抑制HSC-T6细胞增殖;叶酸缺乏组中p-p53和p-p21的表达显著高于其余两组,而p53和p21的在不同浓度叶酸作用HSC-T6细胞内的表达无显著性差异。这表明叶酸缺乏通过上调p53信号通路中p-p53和p-p21的表达促进HSC-T6凋亡;叶酸缺乏组中细胞代谢相关基因a-SMA和Vimentin的表达显著低于其余两组,而E-cadherin显著高于其余两组,随后我们研究了细胞代谢途径中的关键蛋白PKM2的表达,发现叶酸缺乏组中PKM2表达同样显著低于其余两组,这表明叶酸缺乏上调上皮细胞标志物E-cadherin的表达及下调间叶细胞标志α-SMA、Vimentin和PKM2等蛋白表达而表现出MET转变。CCN蛋白因子是具信号传递功能的细胞基质蛋白,参与组织修复反应并涉及肝纤维化发生发展。本研究在制备了高纯度的大鼠原代HSCs并通过体外培养进行激活的基础上,同步定量分析了 6个CCN因子在激活过程中的表达,对CCN因子在HSCs激活过程中的作用进行更全面的评价。