苹果树腐烂病是由苹果黑腐皮壳菌(Valsamali Mayabe et Yamada)引起的一种苹果树枝干皮层腐烂病害,该病害目前已严重阻碍我国苹果产业的发展。多种防治措施见效甚微,主要是对其致病机理目前还不完全明了。一些研究表明,该病菌分泌的胞外果胶酶在病菌侵染过程中可能起着重要作用,但尚未见分离纯化的果胶酶或确定出其胞外果胶酶的种类。本论文首先对苹果树腐烂病菌胞外果胶酶活性与其致病力关系进行了研究,并探索了培养基中使用不同碳、氮源对苹果树腐烂病菌产生胞外果胶酶活性的影响,然后分离纯化了可能与致病性有关的果胶酶。最后对分离得到的纯果胶酶的一些性质进行了研究。取得以下研究结果:1.将3种不同致病力的苹果树腐烂病菌03-8、X907和T1在相同条件下培养发现,发酵第10天的发酵液中胞外果胶酶的活性与病菌的致病力呈正相关。进一步说明果胶酶可能是苹果树腐烂病菌重要的致病因子。2.以野生型菌株03-8为目标菌,对培养基中碳氮源进行优化的结果表明MS培养基中碳、氮源分别为0.50%淀粉和0.25%蛋白胨时,培养10天的滤液中果胶酶的活性最高。3.硫酸铵梯度盐析研究发现,用饱和度为70%的硫酸铵可将发酵液中大部分胞外果胶酶沉淀出来。4.经分子筛柱Sephacryl S-100凝胶过滤层析和阴离子交换柱DEAE-Sepharose Fast Flow分离,变性凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,分离得到一种纯的果胶酶2-S-2。5.根据已知分子量的标准蛋白在SDS-PAGE中的相对迁移率(Rf)做Rf-LogMr图,求得2-S-2亚基的分子量为58.83 kDa。2-S-2经过LC-ESI-MSMS技术,通过NCBI数据库对比为果胶酶中的鼠李糖聚半乳糖醛酸酶,等电点为6.03。6.对2-S-2的其它酶学性质进行研究发现:在pH 2.2～5.5之间2-S-2的稳定性较好,能保证60%以上的酶活力;当温度低于30 ℃时2-S-2可以保持稳定,当温度在40℃时,40min以内时仍能保持80%以上的酶活力,40min以上时,酶活力急剧下降;它的最适反应温度为40 ℃,最适反应pH为3.5;Ca2+对2-S-2酶活力有强烈的激活作用,Li+ 和 Co2+对酶活也有一定的激活作用,而 K+,Fe2+,Pb2+,Zn2+,Cu2+,Mn2+,Ni+等对酶活有抑制作用,Ba2+和Mg2+完全抑制了 2-S-2的酶活性。7.由双倒数法(Lineweaver-Burk)求得2-S-2的米氏常数(Km)为3.600mg·mL-1,最大反应速率(Vmax)为 0.1627mg/(mL·min)。