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目的: EphBs受体及ephrinBs配体存在于成年的大脑及外周组织中，在各种病理、生理性疼痛中具有重要作用。我们及其他实验室的研究已经证明脊髓水平ephrinBs/EphBs信号参与了伤害性信息的调制及中枢敏化。然而，ephrinBs/EphBs信号在外周敏化中的作用尚不清楚。本研究的同的是探讨外周ephrinBs/EphBs受体信号在痛觉过敏中的作用及其机制。
方法:
1.为观察外周注射EphrinB1-Fc是否引起剂量依赖性的痛觉过敏，足底注射不同剂量的ephrinB1-Fc(0.02，0.1，0.5-ug，溶于10ul生理盐水中)；为观察EphrinB1-Fc的效应是否由EphB受体介导，EphB1-Fc(0.5-ug)在注射ephrinB1-Fc(0.5-ug)30分钟前给予，然后观察EphrinB1-Fc注射后30分钟内小鼠自发痛行为，注射后30分钟，1，2，4，8，24，48小时热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值。同时采用免疫组织化学方法检测ephrinB1-Fc(0.5-ug)注射1小时后脊髓背角神经元Fos蛋白表达。
2.为观察外周注射EphrinB1-Fc是否剂量依赖性激活皮肤磷酸化MAPKs，足底注射不同剂量的ephrinB1-Fc(0.02，0.1，0.5-ug)；为观察外周注射EphrinB1-Fc引起皮肤磷酸化MAPKs激活的时间依赖性，足底注射ephrinB1-Fc(0.5-ug)，采用Western blot方法检测ephrinB1-Fc注射后10分钟，30分钟，2，8，24，48小时及免疫组织化学方法检测ephrinB1-Fc注射后30分钟皮肤p-ERK、p-JNK、p-p38表达。
3.为观察MAPKs抑制剂对EphrinB1-Fc引起的痛行为表达的影响，EphrinB1-Fc0.5μg注射前30分钟，注射不同剂量MAPKs抑制剂(ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125、p38抑制剂SB203580，0.02，0.1，0.5-μg溶于10μl 1％的二甲亚砜中)，观察EphrinB1-Fc注射后30分钟内小鼠自发痛行为，注射后1，2，4，8，24小时热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值：为观察MAPKs抑制剂对EphrinB1-Fc引起的痛行为维持的影响，在注射EphrinB1-Fc0.5μg 1小时后给予MAPKs抑制剂，观察注射抑制剂后30分钟，1，2，4，8小时热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值。同时采用免疫组织化学方法检测末次给药后一小时脊髓背角神经元Fos蛋白表达。
4.为研究脊髓水平MAPKs在ephrinB1-Fc引起的痛觉过敏中的作用，采用Western blot方法检测ephrinB1-Fc注射后30分钟内脊髓p-ERK、p-JNK、p-p38的含量；为观察MAPKs对ephrinB1-Fc引起的痛行为表达及维持的影响，在注射EphrinB1-Fc0.5μg前30分钟或一小时后鞘内给予MAPKs抑制剂，观察未次给药后1，2，4，8小时热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值。
5.为观察EphB受体是否参与福尔马林引起的外周MAPKs的激活，在注射福尔马林(2％，10μl)前30分钟，于同一部位注射EphB1-Fc(0.5-ug)，记录注射福尔马林后0～5 min和15～30 min的累积舔足时间和缩足反应次数，免疫组织化学方法检测福尔马林注射后30min内皮肤p-p38，p-ERK，p-JNK表达及一小时后脊髓Fos蛋白表达。
6.为观察NMDA受体是否参与了EphrinB1-Fc引起的MAPKs的激活，注射ephrinB1-Fc(0.5-ug)前30分钟注射NMDA受体抑制剂MK801(2.5-μg)，Westernblot方法观察ephrinB1-Fc注射后30分钟内皮肤p-ERK、p-JNK、p-p38的表达及30分钟，1，2，4，8小时热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值。
结果:
1.不同剂量ephB受体兴奋剂ephrinB1-Fc注射于小鼠右足底，注射后30分钟小鼠的热缩足反射潜伏期及机械缩足反射阈值呈剂量依赖性降低，至少持续到8小时，24小时后趋于正常；ephrinB1-Fc在注射后30分钟内，剂量依赖性增加小鼠舔足时间和舔足次数；足底注射ephB受体抑制剂ephB1-Fc(0.5ug/10ul)未引起小鼠痛行为及基础痛闽的改变，预先注射ephB1-Fc能部分阻断ephfinB1-Fc引起的痛行为；i.p1.ephrinB1-Fc(0.5-μg)能够引起同侧脊髓背角浅层Fos蚩白表达增加，且被EphB1-Fc阻断。 2.与行为学结果一致，ephfinB1-Fc皮下注射10分钟皮肤内p-ERK、p-JNK表达显著增加，30分钟内p-p38表达显著增加。磷酸化MAPK的表达在注射后2小时趋于正常，磷酸化MAPK的表达与ephrinB1-Fc呈剂量依赖性。免疫组化结果也显示皮肤pMAPKs表达增加。
3.预先注射p38抑制剂SB203580，ERK抑制剂U0126，JNK抑制剂SP600125(每种抑制剂0.02，0.1，0.5ug均溶于1％的DMSO内)能阻断ephrinB1-Fc引起的痛觉异常并缩短舔足时间，且呈剂量依赖性；皮下注射ephfinB1-Fc 1小时后注射MAPKs抑制剂，3种MAPKs抑制剂均能逆转ephrinB1-Fc引起的痛行为，并且至少持续至注射抑制剂后8小时；预先注射抑制剂或ephrinB1-Fc注射1小时后注射抑制剂，均能减少ephrinB1-Fc引起的脊髓水平Fos蛋白表达。
4.足底注射ephrinB1-Fc增加脊髓水平MAPKs的表达，预先鞘内注射抑制剂或ephrinB1-Fc注射1小时后注射抑制荆，能阻断或逆转ephrinB1-Fc引起的痛觉过敏。
5.预先注射EphB1-Fc，减少福尔马林引起的舔足时间，缩足反应次数及脊髓Fos蛋白、皮肤p-p38，p-ERK,p-INK表达。
6.预先注射MK801能够阻断EphrinB1-Fc引起的热痛觉过敏、机械性痛觉异常及皮肤MAPKs激活。
结论:
1.激活外周ephrinBs/EphBs信号产生MAPK介导的痛觉过敏：
2.外周NMDA受体介导ephrinBs/EphBs信号激活引起的痛觉过敏及MAPKs的激活。