【摘 要】
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目的研究可溶性TGF-β受体Ⅱ(sTβRⅡ, TGF-β受体Ⅱ胞外区)及突变型Smad4(Smad4△M4,野生型Smad4去除连接部位氨基酸序列)阻断TGF-β/Smads通路双位点较阻断单一位点在抑制
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目的研究可溶性TGF-β受体Ⅱ(sTβRⅡ, TGF-β受体Ⅱ胞外区)及突变型Smad4(Smad4△M4,野生型Smad4去除连接部位氨基酸序列)阻断TGF-β/Smads通路双位点较阻断单一位点在抑制瘢痕相关蛋白生成方面的优越性。方法构建分别含sTβRⅡ和Smad4AM4序列的两种慢病毒,并以不同感染复数(MOI)转染人皮肤成纤维细胞(HFF-1),筛选最适MOI值。将培养的HFF-1分为6组：共转染组、sTβRⅡ组、Smad4AM4组、阴性病毒对照组、阳性对照组及空白对照组。共转染组为两种病毒1：1比例共转染HFF-1; sTβRⅡ组及Smad4AM4组分别为单一病毒转染HFF-1；阴性病毒对照组为空载体病毒转染HFF-1,均采用TGF-β1刺激转染后的细胞。阳性对照组为单用TGF-β1刺激HFF-1；空白对照组为未作任何处理的HFF-1。采用Western Blot/qPCR法检测各组纤连蛋白的相对表达量；ELISA法、Sircol胶原定量试剂盒分别检测各组结缔组织生长因子(CTGF)及总胶原蛋白表达量。采用SNK-q检验对各组数据进行分析。结果两种慢病毒转染HFF-1最适MOI均为50。相对于空白对照组,阳性对照组及阴性病毒对照组纤连蛋白、CTGF及胶原蛋白的表达量最高(P<0.05),但两组间差异无统计意义(P>0.05)；sTβRII组及Smad4△M4组表达量均低于阳性对照组及阴性病毒对照组(P<0.05)；共转染组表达量更低(P<0.05)。结论sTβRII、Smad4AM4均可显著抑制TGF-β1对HFF-1的刺激作用,且共转染比单基因转染的抑制作用更强,从而为临床抗瘢痕的基因治疗提供新思路。
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