CEA MAB的制备、纯化及其双抗夹心ELISA检测方法的初步建立

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癌胚抗原(CEA)是一种与细胞粘着有关的糖蛋白。结肠直肠癌,胃癌,胰腺癌,肺癌,乳腺癌和甲状腺髓样癌患者的血清的CEA表达水平明显高于正常个体。癌胚抗原被用作一种广谱性的肿瘤标志物,运用于大肠癌、乳腺癌、肺癌等癌症的疗效判断、病情发展、监测和预后估计。单克隆抗体是指一类由单一免疫细胞经过克隆后分泌产生的针对一种抗原决定簇的抗体。只要给出任一种底物,就能生产一种单克隆抗体使其专一地结合于那种底物上,所以单克隆抗体可以用来检测和鉴定相应的底物。酶联免疫吸附法是将抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化作用相结合,而建立的一种非放射性标记免疫检测技术。此种技术能有效地检测出样品中抗原或抗体的含量。与其它抗体标记反应方法相比,ELISA有许多优点,如高特异性,高灵敏度,价格低廉且安全可靠。癌胚抗原单克隆抗体ELISA技术对于癌症检测的临床应用具有重要实践意义。本课题利用本实验室已有的CEA单克隆抗体细胞株生产合格的、与国外同类产品具有相同效价的CEA单克隆抗体。建立并优化双抗夹心ELISA方法,以便于CEA的临床检测。主要的研究工作包括:(1)采用杂交瘤细胞的有限稀释法,筛选出表达效率高的细胞株;细胞株经过筛选后的表达效率比原先提高了2倍左右。(2)利用小鼠腹水生产单抗;(3)用Protein-G亲和层析柱一步纯化的方法纯化腹水中的CEA单克隆抗体;(4)对生产的CEA单克隆抗体进行HRP标记及其效价测定;(5)双抗夹心ELISA方法检测CEA最适反应条件的建立。
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