目的：　　1.建立何首乌ISSR–PCR的实验体系及鉴别方法，探讨广西不同产地何首乌亲缘关系，并对不同产地何首乌进行遗传多样性分析，为广西产何首乌优质种源的开发提供质量依据；　　2.探讨广西不同产地何首乌的质量状况，并对其相似度进行评价，为广西不同产地何首乌的鉴别和质量控制提供科学依据。　　方法:　　1.采用ISSR分子标记技术对广西不同产地何首乌进行分子生药学研究，筛选最佳的总 DNA提取方法，通过 ISSR–PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳对PCR反应条件进行优化，筛选出特异性扩增引物，鉴别广西不同产地何首乌，建立DNA指纹图谱。此外，还应用相关分析软件MVSP3.2和Popgene32对样品进行聚类分析和遗传多样性分析。　　2.通过高效液相色谱法建立何首乌指纹图谱，为完善广西何首乌质量体系提供依据。摸索并确定合适的色谱分离条件，选择稳定性好、色谱峰丰富的提取方法对样品进行提取，并进行相关方法学考察，对广西不同产地何首乌进行对比分析，使用“计算机辅助相似度评价软件”进行数据处理，对10批何首乌药材进行相似度比较分析。　　结果:　　1.何首乌总DNA提取方法：CTAB法。　　2.何首乌ISSR–PCR反应体系的优化：25μl反应体系包括1×Taq酶配套缓冲液，1.8m mol·L–1MgCl2，200μmol·L–1dNTP，0.2μmol·L–1引物，1UTaq DNA聚合酶，DNA模板约50 ng。相应的扩增程序为：①94℃预变性5min；②94℃变性30s；③50℃退火1min；④72℃延伸2min；⑤2～4步骤循环45次；⑥72℃延伸10min。　　3.何首乌的DNA指纹图谱研究：选用40条ISSR扩增引物，从中筛选出9条稳定性好、谱带清晰的引物。通过扩增共获得清晰的条带117条，其中多态性条带111条，扩增片段的多态性达到94.87％。其中，引物UBC–840能清晰稳定地区分桂平、田林、桂林、贺州四个产地的何首乌，可作为鉴别何首乌的特异性引物，实现产地间鉴别。此外，引物UBC–815、UBC–845、UBC–852可鉴别出田林、桂林两个产地何首乌；引物UBC–835、UBC–876可鉴别出桂平、桂林两个产地何首乌，引物UBC–818可鉴别出田林、贺州两个产地何首乌。通过UPGMA聚类分析中相似度可知，何首乌根据ISSR标记划分的类型同地理分布有一定关系，地理位臵较近的样品多聚在一起。Shannon多样性指数和Nei遗传多样性指数都一致地表明田林、贺州这两个种源的遗传多样性要比何首乌种源遗传多样性的平均水平高，另外两个何首乌种源的多态性则低于何首乌种源多态性的平均水平。ISSR是鉴别广西不同产地何首乌的有效方法。　　4.何首乌的HPLC指纹图谱的研究：样品提取方法，以甲醇超声处理30 min为佳,其峰信息较多,保留时间有较好的稳定性与重复性。色谱条件以安捷伦Agilent TC–C18(5μm,4.6 mm×250mm)，乙腈–水为流动相进行梯度洗脱，流速为0.8ml·min–1，柱温30℃，检测波长为280nm，进样量10μl。本研究参照峰为何首乌中重要的活性成分二苯乙烯苷。经方法学考察表明，建立的实验方法切实可靠，符合建立指纹图谱的相关规定。借助中药色谱指纹图谱相似度评价系统，共匹配得到6个共有物质峰。得到10批何首乌药材的指纹图谱，并生成对照图谱。运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》，计算各批药材间的相似度和各批药材与对照指纹图谱间的相似度。　　结论:　　1.运用ISSR分子标记对广西不同产地何首乌进行ISSR鉴别研究，建立了最佳实验体系；筛选出9条稳定性好、谱带清晰的引物，并得到了用于鉴别的特异性引物 UBC–840；运用软件 MVSP3.2和Popgene32对扩增结果进行统计分析，证实广西不同产地何首乌遗传关系的差别并进行了遗传多样性分析；探讨了ISSR作为何首乌分子生药学鉴别有效方法的实验过程，方法可行。　　2. HPLC–FPS实验结果反映出广西不同产地何首乌中各种成分的差异，为何首乌药材的质量控制提供依据，为进一步制定何首乌质量标准提供科学基础，促进何首乌药材资源的开发。