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目的：对比评价直接测序法(Sanger法)和PNA-钳制荧光PCR法检测结直肠癌及癌旁组织K-ras基因突变的效果,检测结直肠癌患者血清中K-ras基因突变的临床应用前景,探讨K-ras基因突变与结直肠癌临床病理因素的关系。方法：收集2012年1月至2012年12月在中南大学湘雅医院胃肠外科手术切除的结直肠癌新鲜组织、相对应癌旁组织及术前外周血血清各35例,采用试剂盒法提取DNA,分别采用Sanger测序法和肽核酸(PNA)-钳制荧光PCR(TaqMan-MGB探针法)检测K-ras基因外显子2中第12、13编码子上最常见的7种突变类型,结合其临床资料对检测结果进行比较分析。结果：(1)应用Sanger测序法可在35例结直肠癌组织标本中检出9例,阳性率为25.7%,其中第12密码子突变7例,包括3例35G>A、3例35G>T和1例34G>T,第13密码子突变(即38G>A)2例；35例结直肠癌旁组织均未检出突变。应用PNA-钳制荧光PCR在35例结直肠癌原发灶组织中检出14例,阳性率为40.0%,两者差异具有统计学意义(P=0.0313)。35例结直肠癌旁组织也检出2例突变,但突变比例明显低于其相应的癌组织。(2)35例结直肠癌患者外周血血清中应用PNA-钳制荧光PCR法检出4例,阳性率为11.4%,与用PNA-钳制荧光PCR法检测肿瘤组织K-ras基因突变结果比较,应用Kappa一致性检验,Kappa值为0.189。(3)K-ras基因突变率与结直肠癌患者年龄、性别、组织学类型、肿瘤部位以及TNM分期无明显相关性。结论：(1)应用PNA-钳制荧光PCR检测结直肠癌患者K-ras基因突变率相对于直接测序法(Sanger法)阳性检出率高,方法简便,适合在临床推广(2)应用PNA-钳制荧光PCR法检测结直肠癌患者血清与肿瘤组织中K-ras基因状态结果比较,二者一致性较差。(3)本研究发现临床病理因素与K-ras基因突变之间无明显相关性。