【摘 要】
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软骨损伤是临床的一种常见病和多发病,而传统治疗软骨疾病的方法效果并不理想。随着组织工程学的发展,构建组织工程软骨支架成为修复软骨损伤的方法之一。本研究首先从牛软骨
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软骨损伤是临床的一种常见病和多发病,而传统治疗软骨疾病的方法效果并不理想。随着组织工程学的发展,构建组织工程软骨支架成为修复软骨损伤的方法之一。本研究首先从牛软骨中提取了Ⅱ型胶原蛋白(Type II collagen,CoⅡ),提取率为5.27±0.37%。SDS-PAGE蛋白凝胶成像系统分析,纯度为Sigma标准品的109.18±14.87%。红外-拉曼光谱显示与Sigma标准品出峰一致,紫外光谱显示两者出峰波长相同,氨基酸分析与Sigma标准品氨基酸构成相同。以提取的Ⅱ型胶原蛋白为主要材料,复合透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、硫酸软骨素(Chondroitin sulfate,CS)和羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HAP),通过EDC/NHS交联系统交联构建CoⅡ-HA-CS-HAP组织工程支架。调节HA、CS和HAP的比例,确定物理性能最优的各原料比CoⅡ:HA:CS:HAP为10:1:1:6%HAP,孔径为166.5±12.23μm,孔隙率96.69±0.19%,吸水率2386.31±24.98%,最大拉伸强度454.87±14.06 KPa。将小鼠软骨细胞ATDC-5接种于不同配比的支架上进行细胞相容性实验,Hoechest 33342细胞荧光染色结果显示细胞在支架上可迅速增殖,阿利辛蓝染色发现细胞还可正常分泌酸性糖胺多糖。其中,物理性能最优配比的支架细胞生长最为旺盛,并将其植埋于小鼠皮下进行生物相容性实验。结果显示,HE染色第四天镜检出现中性粒细胞浸润,伴随少量淋巴细胞,随后逐渐消失,第十天镜检观察不到炎症细胞,说明炎症反应已消失。
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