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本文制备了抗GNA的单克隆抗体,并把它用于对GNA转基因大豆的检测。
首先,采用从SIGMA公司购得的GNA纯品免疫BALB/c小鼠,每次8gg,共免疫4次。加强免疫后第四天取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。融合率为5%,阳性率为20.8%。通过4次有限稀释克隆获得了一株抗GNA的杂交瘤细胞株,命名为2D8。以GNA纯品通过Western Blot法和间接ELISA法对单抗2D8进行检测,证明了单抗2D8确实是与GNA蛋白特异性结合的。用间接ELISA法测定腹水的效价为1:400。
采用改良的CTAB法提取GNA转基因大豆的基因组DNA,以根据GNA的全长序列设计的引物进行PCR反应,以非转基因大豆基因组作为阴性对照,证明了GNA转基因大豆中确实整合了GNA的基因。
提取GNA转基因大豆的可溶性蛋白,用单抗2D8对其进行间接ELISA法检测,并以非转基因大豆的可溶性蛋白作为阴性对照,结果证明了GNA转基因大豆确实表达了GNA蛋白,并测得其表达的GNA蛋白占其可溶性蛋白的0.1%左右。进一步利用单抗2D8对GNA转基因大豆的可溶性蛋白进行了Western Blot法检测,同样以非转基因大豆的可溶性蛋白作为阴性对照,也在GNA转基因大豆中检测到了转入GNA基因的表达。
这些结果都为建立一套可以在蛋白水平上,更快捷更准确的对转基因植物进行检测的方法提供了基础。