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目的:人子宫内膜癌是最常见的女性生殖系统的恶性肿瘤之一。主要治疗方法为手术、放疗和药物(化学药物及激素)治疗。目前针对子宫内膜癌有效的靶向治疗仍是临床妇科医生亟待思考的问题,其分子机制也成为近几年的研究热点。本研究旨在研究长链非编码RNA PVT1能否调控子宫内膜癌干细胞(ECSCs)的恶性生物学行为,进一步深入分析可能的分子机制,即PVT1通过下调miR-195-5p进而促进FGFR1和FGF2的表达,促进ECSCs的恶性生物学行为。研究方法:首先应用Real-time PCR方法和荧光原位杂交方法检测PVT1和miR-195-5p在人子宫内膜癌组织中的表达,并分析其与子宫内膜癌临床病例参数之间的关系。然后,利用双荧光素酶基因报告系统检测PVT1和miR-195-5p的靶向结合作用和结合位点。培养人子宫内膜癌细胞系Ishikawa、HEC-1A和RL95-2。之后在本实验中利用无血清悬浮法提取出Ishikawa-ECSCs。应用流式细胞术、免疫荧光和Real-time PCR方法检测其对干细胞相关因子的表达。并通过CCK-8实验、EdU法检测ECSCs的增殖能力,应用Transwell法检测ECSCs的迁移和侵袭能力,并在裸鼠移植瘤实验检测ECSCs对裸鼠移植瘤的生长的影响。接着,应用Real-time PCR方法检测PVT1和miR-195-5p在ECSCs中的表达。通过细胞转染方法构建PVT1和mi R-195-5p过表达和沉默的细胞系。应用CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化。采用Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化。应用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡能力的变化。最后,利用双荧光素酶基因报告系统检测miR-195-5p和FGFR1、miR-195-5p和FGF2的靶向结合作用和结合位点。Real-time PCR方法检测过表达和沉默PVT1后,miR-195-5p表达的变化,Western Blot方法检测FGFR1、FGF2、PI3K、p-AKT1、AKT1、p-Erk 1/2、Erk 1/2、p-p38 MAPK、p38 MAPK蛋白的表达变化。裸鼠移植瘤实验检测PVT1和miR-195-5p对裸鼠移植瘤增殖的影响。结果:PVT1在人子宫内膜癌组织中和ECSCs中表达显著上调。从子宫内膜癌细胞系Ishikawa中可以通过无血清悬浮法分离出ECSCs,并且ECSCs较Ishikawa细胞有更强的增殖能力、迁移和侵袭能力。并在裸鼠移植瘤实验中ECSCs表现出更强的增殖能力,以及对干细胞相关因子(CD44、CD133、Oct4、Sox2和Nanog)的表达更高。沉默PVT1显著抑制ECSCs的增殖,迁移和侵袭的能力,抑制细胞周期S期的阻滞,促进细胞凋亡。miR-195-5p在人子宫内膜癌组织中和ECSCs中表达显著下调。过表达miR-195-5p显著抑制ECSCs的增殖,迁移和侵袭的能力,抑制细胞周期S期的阻滞,促进细胞凋亡。PVT1与miR-195-5p存在靶向结合作用。沉默PVT1通过负性调控miR-195-5p,降低FGFR1和FGF2的表达,进而调控PI3K、p-AKT1、AKT1、p-Erk 1/2、Erk 1/2、p-p38 MAPK、p38 MAPK的表达,抑制了ECSCs的恶性生物学行为。沉默PVT1联合过表达miR-195-5p抑制裸鼠移植瘤的生长。结论:1、PVT1和miR-195-5p在子宫内膜癌组织和ECSCs中内源性表达,PVT1在子宫内膜癌组织和ECSCs中高表达,miR-195-5p在子宫内膜癌组织和ECSCs中低表达。2、利用无血清悬浮培养法从子宫内膜癌细胞系Ishikawa中分离出ECSCs,且能够表达多能干细胞标记物CD44、CD133、Oct4、Sox2和Nanog,具有更强的增殖,迁移和侵袭能力,以及裸鼠成瘤能力。PVT1可通过负性调控mi R-195-5p促进ECSCs的增殖、迁移、侵袭和细胞周期S期的阻滞、以及抑制其细胞凋亡。3、miR-195-5p可与FGFR1和FGF2的3’UTR结合。PVT1可通过负性调控miR-195-5p,进而调控PI3K、p-AKT1、AKT1、p-Erk1/2、Erk 1/2、p-p38 MAPK和p38 MAPK蛋白的表达。