【摘 要】
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该文以酵母蔗糖酶、萝卜过氧化物酶及辣根过氧化物酶为研究对象,检测了不同参数的超声波对其催化活性影响,并对超声波的作用机理做了进一步的探讨.该实验在对酵母的蔗糖酶及
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该文以酵母蔗糖酶、萝卜过氧化物酶及辣根过氧化物酶为研究对象,检测了不同参数的超声波对其催化活性影响,并对超声波的作用机理做了进一步的探讨.该实验在对酵母的蔗糖酶及萝卜过氧化物酶分离和纯化的基础上对其性质进行了研究.面包酵母经反复融冻破碎细胞后离心,取上清液进行超滤浓缩.浓缩液经Sephadex-100凝胶过滤层析、DEAE-52离子交换层析后,酶的比活力提高29.2倍,经聚丙烯酰胺凝胶电泳后,发现其蛋白质谱带明显减少.取市售萝卜块根匀浆后离心得上清液,经超滤浓缩后,浓缩液依次经Sephadex-100凝胶过滤、DEAE-22和DEAE-52离子交换层析步骤后,酶比活力提高12.2倍,电泳分析只呈一条蛋白质谱带.经实验得出酵母蔗糖酶的最适反应pH值范围是4.5-5.0,最适的反应温度是50℃.萝卜过氧化物酶的最适反应pH是5.4,最适反应温度是45℃.实验的第二部分研究了超声波对酶活力的影响.研究对象包括上述两种酶和商品酵母蔗糖酶、辣根过氧化物酶.用频率为19KHz、25KHz、40KHz、80KHz,功率40W-100W的超声波处理自提酵母蔗糖酶,酶活性受到抑制.而商品酵母蔗糖酶在适宜的超声波处理后活性得到了促进.经正交试验可得到19KHz、100W、15min的处理组合可以使商品酵母蔗糖酶活力提高22%.超声波处理使萝卜过氧化物酶的V<,max>变小,K<,m>变大,导致酶活力下降.常温下用超声波对辣根过氧化物酶处理,酶活性变化不明显,但随着处理时间和反应温度的提高,酶活力受抑制.为了进一步研究超声波对酶分子作用的机理,该实验还应用紫外吸收、紫外差示光谱和荧光光谱对酶分子的构型和构象进行分析.经研究发现,上述这几种酶经超声波处理后紫外吸收光谱变化不明显,说明了酶的构型没有发生改变.通过该实验的深入研究,进一步加深了超声波对酶活性影响的机理的认识,深刻地揭示了其中的规律.以上三种酶对超声波处理的响应表现各异,说明了用同样的超声波处理不同的酶会得到不同的结果.实验还发现多因素的协同作用可以加强超声波处理的效果,这将对超声波在各行业中的应用有积极的作用.
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