论文部分内容阅读
烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus，TRSV)、菜豆荚斑驳病毒(Bean podmottle virus，BPMV)、番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus，TomRSV)是三种大豆上常见的种传病毒，在我国属于进境植物检疫性有害生物。一旦随着大豆的进口传入我国，势必对我国的农业生产带来不可估量的损失。目前检测这三种病毒的方法主要是DAS-ELISA和RT-PCR。但是这两种检测方法主要是将疑似感病的大豆种植，待其长出叶片后再利用叶片进行检测。因此，该方法检测周期长，极大的影响了货物的通关速度，给贸易活动造成不便。为快速、准确、方便的检测出种子所带的病毒，有必要建立一套直接以种子中的病毒作为检测对象的检测方法。
本研究以大豆种子作为检测对象，首先利用抗体特异捕捉相应的病毒，然后用高温使病毒的蛋白质外壳破裂释放出RNA，以达到省去抽提RNA的目的。最后借助实时荧光PCR检测方法的高灵敏度特点，达到直接从大豆种子中检测病毒的目的。
将建立的IC-RT-Realtime PCR检测方法，分别用于检测大豆上所带的TRSV、BPMV和TomRSV。检测结果和DAS-ELISA、RT-PCR的检测结果一致，说明所建立的IC-RT-Realtime PCR检测方法是准确的，可信的。通过对DAS-ELISA、RT-PCR、IC-RT-Realtime PCR检测方法灵敏度的比较，得出IC-RT-Realtime PCR检测方法的灵敏度是DAS-ELISA的4～4×108倍，是RT-PCR的1.6～1.6×108倍。
将建立的IC-RT-Realtime PCR检测方法，用于检测大豆、菜豆、豌豆上的TRSV和TomRSV，检测结果显示IC-RT-Realtime PCR检测方法可以成功的检测出三种不同豆类作物上所带的病毒，说明IC-RT-Realtime PCR检测方法具有普遍适用性，可以准确快速的检测出不同寄主上的TRSV和TomRSV。
用TRSV、TomRSV、BPMV和大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus，SMV)、南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus，SBMV)、南芥菜花叶病毒(Arabismosaic virus，ArMV)六种病毒的混合病毒粗提液制作包被管，以检测在其他病毒的干扰下，所建立的IC-RT-Realtime PCR检测方法是否仍能准确、快速的检测出TRSV、BPMV和TomRSV。检测结果显示在其他三种病毒存在的情况下，IC-RT-Realtime PCR检测方法仍能准确的检测出TRSV、BPMV和TomRSV。说明IC-RT-Realtime PCR检测方法具有特异性。由于大豆上所带的病毒常常不只一种，如果一次只检测一种病毒，必然会造成检测时间长、工作量大、试剂耗费大等一系列的问题，所以建立一套多重IC-RT-Realtime PCR检测体系，同时检测多种病毒可以达到提高检测效率，降低检测成本的目的。将三种病毒的特异性引物和探针，同时加入由三种病毒粗提液包被的PCR管中，结果显示建立的多重IC-RT-Realtime PCR检测方法可以同时检测出TRRSV、BPMV和TomRSV三种病毒。