研究背景在当今世界上最常见的恶性肿瘤就属肺癌,其发病率和病死率高居恶性肿瘤首位,其中非小细胞肺癌占了肺癌的绝大多数,比例高达90%。由于肺癌在早期时的症状都比较轻微,不易被人发现,没有明显的不适症状,因此大多数患者发现时都已处于中晚期,只有30%-40%为早中期,因此大多数患者失去了根治机会以及最佳的手术治疗机会。目前,针对肺癌的治疗主要有手术切除、化放疗、免疫治疗、分子靶向治疗这几种方法。虽然几种对肺癌的治疗手段都趋于成熟而且各具优点,但仍然有种种挑战需要面对,但是分子靶向技术在肿瘤药物有着独有的靶向性、有效性和安全性。目前关于非小细胞肺癌临床上主要的问题就是由于早期不易被发现,失去了最佳的治疗时期,患者已经没有手术指针;周身化疗会对人的正常的细胞也有一定杀伤作用;新型的免疫疗法虽然先进,但可能会产生与化疗药物和传统分子靶向药物明显不同的免疫不良反应,因此,研究非小细胞肺癌的分子靶向药物具有重要的意义。在前期的研究中,可以得到在乳腺癌和非小细胞肺癌中,CCR5的表达量升高明显,并且有研究可以证明,抑制乳腺癌细胞的CCR5表达量能诱导乳腺癌细胞凋亡,并且在本实验室的前期研究中也可以得到,非小细胞肺癌中CCR5的表达量同样升高明显,通过计算机筛选得到尼非韦罗是一个CCR5的抑制剂,同时尼非韦罗能够诱导非小细胞肺癌凋亡。根据CCR5与肿瘤的关系,开展基于CCR5筛选抗非小细胞肺癌小分子靶向药物的研究,将为抗非小细胞肺癌治疗提供新思路。自噬是溶酶体内胞质组分降解的总称,在肿瘤的发生发展中起着重要作用,自噬的发生可能会促进肿瘤细胞的凋亡从而促进肿瘤细胞的发生发展,在另一方面也可能会抑制肿瘤细胞的发生发展,所以研究自噬与凋亡的关系是当前肿瘤研究的一个热点与重点,如果能够更好的研究好自噬与肿瘤细胞发生发展的关系,将会为肿瘤的治疗提供更有用的线索。研究目的前期本实验室基于CCR5,通过虚拟筛选证实了尼非韦罗能很好地与CCR5结合,初步实验也证实了尼非韦罗能有效的诱导非小细胞肺癌细胞A549凋亡,本研究基于前期基础,进一步探讨尼非韦罗诱导A549细胞凋亡的机制;另一方面,自噬在肿瘤的发生发展中起着重要的作用,本研究也将探讨自噬与A549细胞凋亡间的关系,为尼非韦罗作为非小细胞肺癌治疗的小分子靶向药物奠定理论基础。研究内容1.首先借助计算机辅助设计,运用Sybly2.1的Surflex-Dock模块开展CCR5与尼非韦罗的分子对接研究,进一步证实尼非韦罗作用的靶点是CCR5,并深入了解其作用模式。2.基于实验室前期关于尼非韦罗能够诱导A549细胞凋亡的研究结果,进一步研究尼非韦罗诱导A549细胞凋亡的机制。3.研究尼非韦罗是否能诱导A549细胞发生自噬,探讨尼非韦罗诱导A549细胞发生自噬与凋亡的关系。4.研究尼非韦罗诱导A549细胞发生自噬的机制,以期为非小细胞肺癌的治疗提供有用的线索。研究结果1.尼非韦罗能够与CCR5晶体在计算机模拟中进行良好的对接。2.尼非韦罗能够诱导A549细胞发生自噬,并且是通过抑制PI3K/Akt/m TOR途径来诱导发生的。3.尼非韦罗处理A549细胞发生的自噬和凋亡是相互促进的。4.尼非韦罗诱导A549细胞发生自噬与CCR5靶点有一定的关系。综上所述,尼非韦罗能够诱导A549细胞发生自噬,并且尼非韦罗诱导A549细胞的自噬与凋亡是一个相互促进的关系。