【摘 要】
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目的：将外源性的重组EGR-1质粒转染卵巢癌细胞,探讨EGR-1在卵巢癌细胞紫杉醇耐药形成过程中的意义,及其与细胞凋亡的关系。 方法：通过目的基因克隆、载体构建技术,将EGR-1基
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目的：将外源性的重组EGR-1质粒转染卵巢癌细胞,探讨EGR-1在卵巢癌细胞紫杉醇耐药形成过程中的意义,及其与细胞凋亡的关系。
方法：通过目的基因克隆、载体构建技术,将EGR-1基因重组于pcDNA3.1质粒中,构建pcDNA3.1-EGR-1质粒,通过Lipofectamine 2000脂质体介导,将此质粒转染入卵巢癌紫杉醇耐药株A2780/Taxol中。光镜下观察细胞形态学改变；流式细胞仪检测转染对A2780/Taxol细胞凋亡的影响,台盼蓝拒染试验检测细胞存活率；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察A2780/Taxol细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50);RT-PCR检测转染前后EGR-1及MDR1 mRNA的表达水平:Western Blot检测p53蛋白及MDR1基因编码的p-糖蛋白的表达。
结果：RT-PCR显示,外源性EGR-1基因通过基因重组及脂质体介导,已整合于A2780/Taxol细胞并获稳定表达,细胞形态学上有所改变；A2780/Taxol/EGR-1组细胞的生长速率较空白对照组和空质粒转染组明显减慢,差异均有统计学意义(P<0.05);转染使细胞凋亡明显增加(P<0.01);MDR1 mRNA及p-gp蛋白表达减少,而使p53蛋白表达上调：并降低了A2780/Taxol细胞对紫杉醇药物的耐受性。
结论：转染EGR-1可抑制A2780/Taxol细胞的生长,降低A2780/Taxol凋亡的阈值和下调MDR1的表达,从而减少A2780/Taxol细胞对紫杉醇药物的耐受性。p-gp为EGR-1的下游靶向基因,EGR-1调控的细胞凋亡依赖于p53途径。
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