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目的： 错合畸形是一类严重影响人类美观和健康功能的疾病，正畸治疗是解除此类畸形的主要手段，其核心机制是在机械应力作用下，通过对牙周细胞生物学功能的调节，产生定向牙齿移动，维持牙周组织的平衡。在此过程中细胞生物力学调节机制若发生异常，可破坏应力状态下牙周组织的正常改建，阻碍正畸牙齿移动或导致牙齿松动脱落。 信号通路（如mTOR、Wnt、TGF-β、BMP等）在转录水平对细胞分化起着至关重要的调控作用。而MicroRNA(miRNA)的发现，又将细胞分化的调控热点引入转录后水平时代。miRNA是一类长约19～24个核苷酸的小分子非编码(Non-coding) RNA，它们能够识别特定的靶基因，并负向调控其表达。研究表明miRNA对细胞增殖和分化过程起到了重要的调控作用。在生物体内，各种生命活动是以相互关联的信号通路(Signaling pathway)来执行的，彼此关联的信号通路构成复杂的调控网络。研究发现，miRNA更倾向于选择信号转导通路上的蛋白作为靶基因，因而能够在转录后水平对信号通路进行精确的调控。此外，miRNA因其靶基因数量庞大且种类繁多，能够广泛地参与到基因调控网络中，从而发挥多种生物学作用。因此，本课题拟通过体外培养PDLCs，采用流体剪切力诱导PDLCs成骨分化模型，探讨与PDLCs成骨相关miRNAs表达谱的建立及特异性miR-132的筛选与确定;研究miR-132在PDLCs骨向分化中的生物学作用以及miR-132调控PDLCs骨向分化的作用机制，为阐明机械应力对PDLCs功能调节机制，明确组织特异性细胞骨向分化的分子机制，揭示正畸牙周组织和牙槽骨改建机理具有重要的意义。 方法： 1、使用酶消化联合组织块法体外分离培养PDLCs;建立体外流体剪切力诱导PDLCs成骨分化模型;检测流体剪切力诱导PDLCs骨向分化过程中Ca2+浓度，碱性磷酸酶表达，采用Real-time PCR和western blot技术检测成骨相关因子表达，确定流体剪切力诱导PDLCs骨向分化作用。 2、采用Agilent公司的Whole Human Genome Array miRNA表达谱芯片对流体剪切力诱导PDLCs成骨分化差异miRNAs进行筛选;Real-time PCR对芯片结果进行验证;建立人PDLCs流体剪切力成骨诱导前后miRNAs表达谱;筛选及确定在PDLCs骨向分化过程中，发生特异性改变的miRNAs; Real-time PCR验证特异性miRNA-miR132在PDLCs成骨分化过程中的表达时相。 3、通过细胞转染技术过表达和抑制miR-132在PDLCs中的表达，采用Real-time PCR和Western blot技术观察转染后细胞成骨分化能力的差异;明确miR-132对PDLCs骨向分化的调控作用;Western blot检测过表达和抑制miR-132后，mTOR通路相关蛋白表达情况，探讨miR-132调控PDLCs骨向分化可能的信号通路及之间的相互关系。 结果： 1、体外培养PDLCs，观察其生物学特性，采用流体剪切力诱导其骨向分化，结果显示流体剪切力可以促进PDLCs成骨分化，Real-time PCR及Western blot检测成骨相关基因均表明PDLCs的骨向分化能力增强。 2、基因芯片结果显示，流体剪切力诱导PDLCs成骨分化后58个miRNA表达水平发生了改变，选择4个microRNA进行Real-time PCR验证芯片结果，芯片准确性良好;同时发现其中以miR-132变化最为显著。 3、通过转染miRNA载体来过表达或沉默miR-132发现，流体剪切力诱导的PDLCs成骨分化有所改变，说明miR-132对PDLCs成骨分化具有特异性的调控作用，这种作用可能是通过mTOR通路来实现的。 结论： 1、流体剪切力可以诱导体外PDLCs成骨分化。 2、miR-132在流体剪切力诱导PDLCs成骨分化过程中具有特异性表达。 3、miR-132可能是通过mTOR通路来调控流体剪切力诱导PDLCs成骨分化