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本文以凡纳滨对虾为研究对象,设置了五个浓度的铜添加量,分别为0、15mg/kg、30mg/kg、45mg/kg和60mg/kg(实际铜含量为11.12 mg/kg、19.10 mg/kg、30.27 mg/kg、49.18 mg/kg、63.48 mg/kg)。每组三个平行,养殖8周后,利用生物化学以及realtime-PCR技术测定凡纳滨对虾血细胞和肝胰腺中的酚氧化酶原激活系统和抗氧化系统的酶活及相关基因的mRNA表达量。
结果表明,当铜添加量为30mg/kg时,凡纳滨对虾的特定生长率、血细胞总数和吞噬活力均在此组达到最大,说明当饵料中铜添加量为30mg/kg时对虾生长最快。而抗超氧阴离子的活性、GST活性在添加45mg/kg铜时最高。PO和SOD活性分别在添加30mg/kg和45mg/kg铜时最高,两组间没有显著性差异。在铜添加量为15-45mg/kg范围内,CAT活性都能维持在一个较高的水平。
本实验还研究了饵料中不同铜浓度对凡纳滨对虾血细胞中酚氧化酶原系统重要基因(proPO-1、proPO-2、Sp、Pe),以及血细胞和肝胰腺中MnSOD、GST、GPX、CAT、血蓝蛋白、Ferritin等重要抗氧化基因表达的影响。结果表明,在饵料中添加45 mg/kg铜时,凡纳滨对虾血细胞中的proPO-1和proPO-2基因表达量最高;PE和丝氨酸蛋白酶的mRNA表达量也是各组中最高的。血细胞和肝胰腺中的MnSOD基因表达量均在添加45mg/kg铜时达到最高。血蓝蛋白与CAT也在添加45mg/kg时有最高的基因表达水平。同时铁蛋白在血细胞中的mRNA表达也是各组中最高的,但是在肝胰腺中的表达量确是在添加60mg/kg铜时最高。
GST基因表达量与其他基因的的变化趋势相反,在添加30mg/kg 铜时最低。GPx在添加30-45mg/kg时表达量最低。说明基础饵料中添加45 mg/kg铜是是凡纳滨对虾处于最活跃的免疫状态。
通过本实验得知,不同的基因在机体内对铜的敏感性有所不同,但是总体来说,当饵料中添加30mg/kg铜时,凡纳滨对虾生长最快;添加45 mg/kg可以使凡纳滨对虾维持一个免疫水平较高的机体环境。而过高和过低的铜含量对机体都有一定的不利影响。