白血病是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤,迄今白血病的治疗仍主要采用传统的大剂量联合化疗,但此疗法副作用大,复发率高,而且对正常机体免疫与造血系统有极大的损害。研究恶性肿瘤尤其是白血病细胞的诱导分化及逆转机制已成为当今生物医学领域内最热点的前沿课题之一。值得注意的是中药以其调节阴阳平衡、注重整体、攻补兼施、毒副作用小、应用范围广泛的优越性得到了广泛认可和重视。从祖国医学宝库中寻找出既能促进正常造血,又能抑制白血病细胞恶性增殖,并诱导其向成熟方向分化的天然诱导分化剂已成为治疗白血病的希望和重要途径。 人参(Panax Ginseng C.A.Meyer)作为祖国传统医学的“补气”要药,已有数千年的临床应用历史,人参多糖(Ginseng polysaccharide,GPS)是人参的主要有效药物成分之一。中医气血理论认为:人参有“补气生血”之功效,我们既往研究表明:GPS 是人参中促进血细胞发生的有效成分, 对小鼠多能造血干细胞(CFU-S)、 人与小鼠造血祖 细胞(BFU-E、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E 等)的增殖分化有显著刺激作用;对造血系统恶性肿瘤的增殖有抑制作用。迄今为止,尚未见人参多糖对白血病增殖抑制及诱导分化的分子机理的研究报道。K562细胞是一种分化很低的人类髓系白血病细胞,具有向红系、粒-单核或巨核系细胞分化的可能性,是研究白血病细胞增殖分化的理想模型。本研究采用现代生物学技术,系统的探讨了人参多糖对 K562 细胞增殖、分化的影响,旨在阐述人参“补气生血”与抗肿瘤相互关系的生物学机制,为研究天然诱导剂提供理论与实验依据。 本研究采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术(FCM),研究 GPS 体外作用对 K562 细胞增殖的影响及其与细胞周期调控的关系;通过光镜、电镜观察与图像分析法,研究经 GPS 诱导后 K562 细胞形态学(包括胞核成熟情况、核浆比例、细胞直径、细胞体积、细胞器及特殊物质形成)改变;细胞化学染色检测细胞内血红蛋白、过氧化物酶及非特异性脂酶含量的变化;通过免疫细胞化学技术对细胞表面分化抗原(CD14、CD15、HIR2)的表达进行检测;免疫细胞化学法检测经GPS 诱导后 K562 细胞表达原癌基因(C-MYC、BCL-2)蛋白产物的变化;FAS、FAS-L 法及 MTT 法检测经 GPS 诱导后 K562 的凋亡情况。RT-PCR 检测经 GPS 诱导后 K562 细胞 EPO、GM-CSF 及其受体 mRNA的表达;免疫组织化学、Western blot 方法检测经 GPS 诱导后 K562 细胞 EPO、GM-CSF 蛋白及其受体蛋白的表达。免疫组织化学、RT-PCR、Western blot 技术检测经 GPS 诱导后对 K562 细胞增殖分化信号转导分子 JAK2、NF-κB、STAT5 的影响。基因芯片技术筛选与分析人参多糖作用 K562 细胞后差异基因的表达。在移植人白血病细胞(K562),成功建立白血病动物模型(SCID 小鼠)的基础上;利用白血病动物模型