作为最常见的内分泌恶性肿瘤之一，近20年来，甲状腺癌的发病率在全球范围内迅速上升，而且女性的发病率明显高于男性。甲状腺癌分为乳头状癌、滤泡癌、未分化癌和髓样癌四种类型。其中甲状腺乳头状癌(Papillary ThyroidCarcinoma PTC)是发病率最高的一种，约占59.9～89.0％。它的发病机制尚不明确。可能与基因改变、激素作用、环境作用如放射线照射等有关。目前研究结果表明甲状腺乳头状癌与RAS、BRAFV600E点突变和RET/PTC重排;抑癌基因CDH1，PTEN和RASSF1基因启动子甲基化，碘代谢相关基因TSHR和NIS启动子的甲基化，以及各种microRNA的上调，或下调有关。　　 人类错配修复基因hMLH1的表达产物，hMLH1蛋白是人类DNA错配修复途径的重要组成部分。在人类DNA错配修复系统中，hMLH1基因的表达产物通过联合PMS2协同介导MSH2及其它有功能的修复酶与错配基因结合，增强修复效能，但hMLH1蛋白本身并不直接参与错配修复。该基因的失活hMLH1基因的失活与大肠癌、胃癌、食管癌、肾细胞癌、宫颈癌、胰腺癌的发生有关。　　 钠碘同向转运体(sodium iodide symporter NIS)及促甲状腺激素受体（thyroid-stimulating hormone receptor TSHR）是甲状腺滤泡上皮细胞、癌细胞摄碘过程中的关键基因。表观遗传学调控机制，如小RNA、DNA甲基化、组蛋白修饰等都影响着NIS、TSHR的表达量。缺乏或异位表达NIS可能导致甲状腺癌细胞摄取放射碘能力降低，导致较差的预后。促甲状腺激素(thyroid-stimulatinghormone TSH)和TSHR亦可调控NIS的表达以及转录后至细胞膜的靶向运输。因此，TSHR和NIS自身的合成代谢及翻译后细胞内定位似乎受到对方直接或间接的调控，但目前尚缺乏相关研究。　　 DNA启动子甲基化是基因组表观调控最重要的组成部分，主要在转录水平调控基因的表达。由于年龄、代谢、环境等多种因素均能影响DNA甲基化，故而DNA启动子的异常甲基化存在于几乎所有恶性肿瘤中。由于肿瘤相关基因的启动子和基因组的异常甲基化可以随坏死肿瘤细胞进入外周血体液，因此还可以通过检测血清、血浆、尿液、腹水等体液内的异常甲基化来间接反应组织的甲基化情况，并有望成为一种有效的肿瘤分子标志物。　　 本项研究旨在利用荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)检测152例甲状腺乳头状癌及癌旁正常组织中hMLH1基因启动子区5-CpG岛的甲基化情况，探讨癌组织中该基因甲基化水平与各项临床病理因素之间的相关性。并进一步通过结合碘代谢相关基因NIS、TSHR在甲状腺乳头状癌组织中的甲基化数据，分析hMLH1基因甲基化和碘代谢相关基因甲基化之间的关系，从而探讨hMLH1基因甲基化在甲状腺乳头状癌中可能的作用机制。　　 本研究由三部分组成:　　 第一部分甲状腺乳头状癌中hMLH1基因启动子区5-CpG岛的异常甲基化及其临床意义研究。　　 目的:　　 检测在甲状腺乳头状癌中hMLH1基因启动子甲基化的状态，并探讨其异常甲基化与临床病理特征之间的关系。　　 方法:　　 采用实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应(real-time methylation-specificPCR，MSP)分别检测152例PTC患者癌及癌旁正常组织中hMLH1基因启动子区域5-CpG岛甲基化状况，并分析其与各临床病理特征参数之间的关系。　　 结果:　　 1.在癌组织中hMLH1基因甲基化的百分率为37.5％(57/152)，显著高于癌旁正常组织的5.3％(8/152)(p＜0.0001)。　　 2.所有PTC病例中，肿瘤原发灶最大径大于等于2cm病例的hMLH1基因甲基化阳性百分率为48.1％(26/54)明显高于原发灶最大径小于2cm病例的31.6％(31/98)(p=0.044);　　 3.多发病灶的甲状腺乳头状癌病例甲基化阳性率为47.3％(35/74)也明显高于单发病灶病例的28.2％(22/78)(p=0.015);　　 4.肿瘤腺外侵犯组的甲基化阳性率为45.3％(34/75)，亦明显高于局限限内的29.9％(23/77)(p=0.049);　　 5.颈淋巴转移组的hMLH1基因甲基化阳性率为46.2％(36/78)，明显高于无颈淋巴转移组的28.4％(21/74)(p=0.024);　　 6.较晚的T分期患者(T3/T4) hMLH1基因甲基化阳性百分率为45.7％(37/81)明显高于较早的T分期患者(T1/T2)28.2％(20/71);　　 7.本组病例中发生远处转移的2例均存在甲基化，比例大大高于无转移组，但是由于例数太少，统计结果无意义;　　 8.关于年龄对甲基化的影响，若以对PTC临床分期最有意义的45岁分组，甲基化分布无明显差别(p=0.151)，但若以60岁分组，60岁以上组的甲基化阳性率(70.6％5/12)明显高于60岁以下组(33.3％45/90)(p=0.003);　　 9.而在本次研究中，性别、病理分期等因素与hMLH1甲基化无关(p值均＞0.05)。　　 结论:　　 hMLH1基因启动子的异常甲基化在甲状腺乳头状癌病例中十分常见，与甲状腺乳头状癌进展、转移等密切相关。　　 　　 第二部分甲状腺乳头状癌中碘代谢相关基因NIS、TSHR启动子区的异常甲基化研究。　　 目的:　　 检测碘代谢相关基因NIS、TSHR启动子在甲状腺乳头状癌及癌旁组织中甲基化的状态　　 方法:　　 采用实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specificpolymerase chain reaction，MSP)分别检测152例PTC患者癌及癌旁正常组织中碘代谢相关基因NIS、TSHR启动子区域5-CpG岛的甲基化状况。　　 结果:　　 1.在癌组织中NIS基因甲基化的百分率为52.6％(80/152)，显著高于癌旁正常组织的7.2％(11/152)(p＜0.0001)。　　 2.在癌组织中TSHR基因甲基化的百分率为30.9％(47/152)，显著高于癌旁正常组织的6.58％(10/152)(p＜0.0001)。　　 结论:　　 碘代谢相关基因NIS、TSHR启动子的异常甲基化在甲状腺乳头状癌病例中十分常见，提示这两个基因与甲状腺乳头状癌进展、转移等有关。　　 第三部分甲状腺乳头状癌中hMLH1基因异常甲基化和碘代谢相关基因NIS、TSHR异常甲基化的相关性分析。　　 目的:　　 通过分析甲状腺乳头状癌中hMLH1、NIS、TSHR基因启动子异常甲基化之间的相关性，来探讨hMLH1基因启动子异常甲基化在甲状腺乳头状癌进展中的可能机制。　　 方法:　　 采用Pearson相关性分析来评估hMLH1基因的异常甲基化和NIS、TSHR基因异常甲基化百分率之间的相关性。采用二项logistic回归分析hMLH、TSHR、NIS基因异常甲基化在单独及协同作用下对甲状腺乳头状癌各临床病理参数的相对风险值OR、95％置信区间及相应P值来评估各基因的异常甲基化对临床病理参数的独立、协同影响。　　 结果:　　 1.在癌组织中hMLH1与TSHR、hMLH1与NIS、TSHR与NIS异常甲基化之间的相关系数(r)分别为0.287、0.318、0.369，且p值均＜0.0001.。提示hMHL1、TSHR、NIS三基因的异常甲基化不存在相关性。　　 2.二项logistic回归分析结果显示hMLH1基因甲基化阳性时临床分期为Ⅲ/Ⅳ的风险为hMLH1基因甲基化阴性时的77.034倍(95％CI:1.616-3671.567)，且p=0.028。模型中剩余的各协变量p值均＞0.05。提示hMLH1基因甲基化是较高临床分期的风险因素之一，且该因素和TSHR、NIS基因甲基化之间不存在协同作用。　　 3.二项logistic回归分析结果显示hMLH1基因甲基化阳性时原发灶大小≥2cm的风险为hMLH1基因甲基化阴性时的35.445倍(95％CI:1.008-1245.983)，且p=0.049。模型中剩余的各协变量p值均＞0.05。提示hMLH1基因甲基化是较大原发灶的风险因素之一，且该因素和TSHR、NIS基因甲基化之间不存在协同作用。　　 4.二项logistic回归分析结果显示TSHR基因甲基化阳性时腺外侵犯的风险为TSHR基因甲基化阴性时的209.068倍(95％CI:6.415-6813.598)，且p=0.003。模型中剩余的各协变量P值均＞0.05。提示TSHR基因甲基化是腺外侵犯的风险因素之一，且hMLH1基因和TSHR、MIS基因甲基化之间不存在协同作用。　　 5.二项logistic回归分析结果显示TSHR基因甲基化阳性时T分期为T3/T4的风险为TSHR基因甲基化阴性时的260.458倍(95％CI:7.044-9629.97)，且p=0.003。模型中剩余的各协变量p值均＞0.05。提示TSHR基因甲基化是较高T分期的风险因素之一，且hMLH1基因和TSHR、NIS基因甲基化之间不存在协同作用。　　 6.二项logistic回归分析结果显示TSHR基因甲基化阳性时淋巴转移的风险为TSHR基因甲基化阴性时的36.844倍(95％CI:0.980-1385.201)，且p=0.051。模型中剩余的各协变量p值均＞0.05。提示TSHR基因甲基化可能是淋巴转移的风险因素之一，且hMLH1基因和TSHR、NIS基因甲基化之间不存在协同作用。　　 7.二项logistic回归分析结果显示hMLH1基因甲基化不是原发灶数量的风险因素，且他和TSHR、NIS基因甲基化之间不存在协同作用。　　 结论:　　 hMHL1、TSHR、NIS三基因的异常甲基化不存在相关性。hMLH1基因启动子的异常甲基化是较高临床分期和较大原发灶大小的风险因子。TSHR基因启动子的异常甲基化是较高T分期和腺外侵犯的风险因子。hMLH1、NIS、TSHR三者异常甲基化的协同效应对于PTC各临床病理参数无影响。