前言 随着分子生物学技术的进展，血管生成(angiogenesis)成为当今国际生物医学界研究的热点之一。它是一系列生理病理过程中的重要环节，在胚胎发生、炎症、创伤修复和肿瘤发生、转移中发挥重要作用。血管生成被多种不同的分子调控，成纤维细胞生长因子家族(fibroblast growth factors，FGFs)就是其中的一类重要因子。FGFs是相关多肽家族，可影响有丝分裂和抑制细胞凋亡，调控许多组织过程(包括正常发育、肿瘤发生和转移)。其中主要由酸性FGF(acidic FGF)和碱性FGF(basic FGF)组成。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)分布于许多组织和细胞，发挥有丝分裂原作用和影响血管生成，在肿瘤的发生发展中起重要作用。CD34是血管内皮细胞的特异性标记物，CD34的免疫组化染色，被应用于多种肿瘤组织的微血管密度(microvessel density，MVD)的检测。在许多肿瘤中，bFGF的表达与MVD有显著联系。成釉细胞瘤(ameloblastoma，AB)中二者关系未见报道。 AB是最常见的牙源性肿瘤，发病率因地区和国家不同而有差异。WHO1992年牙源性肿瘤重新分类中，把AB定为良性肿瘤，但由于其局部呈侵袭性生长，高复发，可恶变、转移，有学者称之为交界性肿瘤。同样，牙源性角化囊肿(odontogenic keratocyst，OKC)也为颌骨内常见最具侵袭性的囊肿，其生物学行为同样不甚清楚。本实验采用免疫组化方法，检测AB和OKC中CD34和bFGF的表达，对CD34阳性血管进行MVD记数，并进行相关性分析，探讨bFGF参与血管生成的机制，研究AB的细胞分化与其生物学行为的关系，为肿瘤的诊断、治疗和预后提供有力的理论依据。 材料与方法 1．方法：免疫组化检测bFGF及CD34表达，bFGF采用SABC法，CD34采用S-P法。标本取自中国医科大学口腔医院和附属第一医院病理存档蜡块，其中AB61例(原发36例，复发19例，恶变6例)，OKC11例，口腔正常粘膜4例。 2.结果判定:胞浆出现棕黄色颗粒为阳性着色。用改良打分法半定量分析bFGF表达。A(按切片中细胞显色有无及深浅评分):O分为细胞无色;1分为浅黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色。B(按切片中显色瘤细胞占切片中瘤细胞的比例评分):1分为25%以下;2分为25一75%;3分为75%以上。每例积分=A xB，按积分高低分为:阴性(一)，积分0分;弱阳性(+)，积分1一4分;强阳性(++)，积分>4分。CD34表达的判定:排除肿瘤出血区及边缘反应区，低倍镜(40x、1 oox)观察确定每例切片中微血管密度最高区域(热点)，然后在高倍镜下(200x)计数微血管的数目，采用双盲法取3个视野的平均值作为该片的MVD。 3.统计学方法:采用SPSSI 1 .5统计软件。采用KrUsk滋一wallis秩和检验、AN0vA方差分析和Kendall’stau一b等级相关分析。P<0.05为有统计学意义。实验结果 bFGF在正常口腔粘膜上皮棘浅层细胞浆中50.0%有弱阳性表达，n例OKC中阳性表达有所增加，阳性率为72.7%，表达部位多位于棘浅层。在61例AB中，阳性率为86.9%，阳性表达位于细胞的外周层及星网状细胞浆中。但不同细胞可有不同表达，角化和颗粒样变细胞浆为弱阳性或阴性。AB瘤周可见血管内皮细胞、炎性细胞浆中有阳性表达，间质中9例成纤维细胞为阳性表达。AB、OKc与正常上皮的表达分组有显著差异(P<0 .01)。我们还把AB按临床生物学行为分组(原发36例，复发19例，恶变6例)进行统计，从表达趋势看伴随着AB的复发及恶变，bFGF阳性表达率及强度均随之增加(P<0.05)。 CD34在4例正常粘膜上皮下阳性血管呈散在分布。OKC下血管多呈串珠状或簇状紧挨着上皮下，但数量比正常上皮下为多。在AB中CD34呈广泛阳性表达，且数量明显增多。血管分布有三种形式，恶性AB多为以血管为中心肿瘤细胞呈袖套状围绕其周围或在侵袭性瘤细胞周缘血管呈串珠状排列，良性AB多为弥漫散在或在侵袭性肿瘤周边呈簇状排列。但角化退变细胞周常缺乏血管。AB、OKc、正常上皮中MVD值组间比较具有显著统计学意义(P<0 .001)。另外，伴随着AB的复发与恶变MVD也逐渐增加(P<0.001)。我们对61例AB中bFGF表达强度与MVD值进行Kendall’。tau一b等级相关分析，得到相关系数rk二0.697，P<0.001，说明二者有相关性。讨论 实体肿瘤的血管生成是一种病理性特征，肿瘤细胞的快速增殖，局部侵袭及转移与肿瘤新生血管有关。而bFGF是一种重要的血管生成因子，目前已在多种肿瘤包括肝癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌、卵巢癌、口腔鳞癌等组织中检测到bFGFmRNA或其蛋白质的过度表达。但bFGF与AB血管生成的关系却未见报道。此次我们首次采用免疫组化方法对61例AB和11例OKC进行研究，实验结果表明在AB和OKC中均有bFGF表达，与正常粘膜相比具有显著统计学意义。此外我们的实验表明随着AB的复发与恶变，bFGF表达趋势上升，说明bFGF与AB的生物学行为密切相关。这一点在以前的研究中尚未见报道。在AB中及部分成纤维细胞核中阳性说明bF-GF与组织分化阶段的核活动有关，导致核内多种转录因子的激活，促使AB的发生、发展、侵袭和浸润。 瘤内微血管密度在