【摘 要】
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Wnt 信号传导途径的调控失常是导致多种类型细胞发生癌变的主要原因之一,该途径成员之一 beta-连环蛋白/T 细胞因子 4 的激活可促进癌变,而另一成员(inhibitor of beta-caten
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Wnt 信号传导途径的调控失常是导致多种类型细胞发生癌变的主要原因之一,该途径成员之一 beta-连环蛋白/T 细胞因子 4 的激活可促进癌变,而另一成员(inhibitor of beta-catenin and Tcf-4,beta-连环蛋白/T 细胞因子抑制子)ICAT 通过阻止 beta-连环蛋白/T 细胞因子 4 复合物的形成而对 Wnt 信号传导途径进行负调控来发挥抑癌作用。 本课题运用基因克隆技术,从正常人肝组织中克隆了 ICAT 并构建了 pET-32a(+)-ICAT 原核表达载体。利用大肠杆菌表达体系表达ICAT,并检测该蛋白在体外对肿瘤细胞增殖活性的影响,以便进一步研究其作用机理并且为临床应用奠定基础。 第一章:以正常人肝组织为材料,提取组织总 RNA,用 RT-PCR方法扩增出人 ICAT cDNA,将其克隆入 pET-32a(+)载体中并测序鉴定。 第二章: 在大肠杆菌中用 IPTG 诱导表达 ICAT,用 Ni2+-NTA琼脂糖树脂亲和层析对 ICAT 蛋白进行纯化,并对目的蛋白梯度透析复性。 第三章:利用 MTT 比色法分析 ICAT 对人乳腺癌细胞株 MCF-7和 MDA-MB-231 增殖活性的影响。亚克隆技术将 ICAT 基因亚克隆到真核表达载体上构建真核表达载体 pcDNA3.1(+)-ICAT,转染人乳腺癌
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