用豚鼠建立了猪链球菌2型（Streptococcus suis Type 2）引致脑炎和败血症的动物模型，研究了猪链球菌2型在动物模型体内的动态分布。并将该菌毒力相关的溶菌酶释放蛋白基因（mrp）克隆到真核表达载体构建了真核表达质粒，并研究其对豚鼠的免疫效果。 1 选用对猪具有致病性的猪链球菌2型江苏分离株HA9801感染豚鼠，引致脑炎及败血症，建立了动物模型。结果显示16～24日龄的豚鼠较易感，最佳感染途径是皮下注射，鼻腔、腹腔次之。感染豚鼠表现出典型脑炎的临床症状及病理变化。经重复试验检测了该菌株对豚鼠的LD₅₀，从感染死亡豚鼠体内包括脑脊液、大脑、血液及各实质器官均可分离出该病原菌，与仔猪自然感染情况相似。该动物模型的建立，为进一步探究猪链球菌2型感染的体内动态分布、感染机制、毒力因子及免疫应答奠定了基础。 2 用猪链球菌2型江苏分离株HA9801，皮下或鼻腔接种豚鼠，检测体内动态分布。结果显示：皮下接种后，该菌最早可于28小时到达心血，32小时还可在肺、脾及扁桃体中分离到，32～36小时除上述器官外还见于肝、肾、脑、脑脊液，并引发神经症状而致豚鼠死亡，接种后120小时心血和扁桃体阳性率分别可达61.5％和69.2％。鼻腔接种同居感染表明，该菌很快传播给其它豚鼠，第8天鼻腔拭子阳性率100％（10/10）；感染豚鼠心血细菌检查结果表明，第9天50％呈阳性，第12天70％（7/10）呈阳性。脑组织检查结果显示，只有出现神经症状及死亡的豚鼠，才能从脑脊液和脑组织中分离到细菌，说明细菌突破血脑屏障，是引发脑炎的前提。 3 将含有猪链球菌2型mrp基因的质粒pMR11，在大肠杆菌中表达了136KD的该菌溶菌酶释放蛋白（MRP，muramidase-released protein），将表达菌用超声波破碎制成的抗原，免疫豚鼠，通过免疫转印检测到MRP的特异抗体，用PPA-ELISA对检测了血清效价；攻毒表明表达蛋白对猪链球菌2型有一定的保护作用。 南京农业大学 博士学位论文 4用地高辛分别对猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白基因（mrp）和胞外蛋白基因（epf）进行了高效标记，结果探针特异敏感，提取23株猪源涟球菌和1株人源的猪链球菌共24株菌的MA，进行斑点杂交检测，结果mrp／mrp＊和ePf／ePf＊阳性率均为 58．33％（14／24），PCR结果和 ELISA检测 MRP结果一致。表明地高辛标记的核酸探针，可用于猪链球菌2型的分子流行病学涉调查。 5将猪链球菌2 型编码MRP的mrn基因，插入到真核表达载体pcDNA3．1(一MccHisC质粒CMV启动于的下游，构建了真核表达质粒pCMR。应用PCR技术能扩增出885hp的mrp基因的特异条带，通过双酶切鉴定克隆方向正确，将该质粒用脂质体转染方法转染卯／0细胞，应用RT－PCR、免疫转印和免疫细胞组化染色，鉴定其得到了表达，为进一步在体内研究mrp基因的功能和作用机制奠定了基础。 6用脂质体包裹的含有猪链球菌 2型 mrp基因的真核表达质粒（pcMR）及该菌 HA980株全菌灭活抗原，分别免疫模型动物豚鼠，肌肉注射，通过厂PA－ELISA检测抗体的产生。免疫后，豚鼠产生MRP抗体滴度呈上升趋势；免疫 2用后，MTT法检测脾淋巴细胞转化率（SI）、腹腔巨噬细胞吞噬活性（AMA），基因免疫引起的细胞兔疫比全菌兔疫组强烈。兔疫后第 16天，各组豚鼠接种 HA9801攻毒，结果显示，mro基因免疫效果虽不如全菌疫苗组，但对豚鼠有一定的保护力，说明MRP具有一定的保护性功能