天麻对大鼠脑缺血保护作用的体内实验研究

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本文主要从以下几方面进行了论述:  第一部分 天麻对局灶性脑缺血再灌注大鼠保护作用的实验研究  目的:探讨天麻对局灶性脑缺血再灌注大鼠保护作用及机制,为临床治疗缺血性脑血管病提供更客观的实验依据。  方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分为尼莫地平组、模型组、天麻低剂量组、天麻中剂量组、天麻高剂量组、假手术组,选择七项观察指标,包括神经功能缺失体征评分、脑含水量、CV染色、光镜、电镜、TTC染色、TUNEL法分别观察天麻对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能、脑水肿、脑梗死体积和细胞凋亡等的影响。  结果:(1)天麻各剂量组神经功能缺损明显减轻,与CIR组相比均有显著性差异。(2)脑含水量、CV染色观察,天麻各剂量组能够减轻脑水肿和脑水肿引起的缺血半球肿胀率,各时间点与CIR组相比有显著性差异。(3)光镜与电镜的观察,表明天麻各剂量组可明显改善缺血再灌注对神经细胞的损伤,对神经细胞起到保护作用。(4) TTC染色观察,脑缺血1h再灌注24h,天麻各剂量组脑梗死体积明显缩少,与CIR组相比均有显著性差异。(5) TUNEL法观察,天麻各剂量组缺血周边区凋亡细胞明显减少,与CIR组相比均有显著性差异。 结论:天麻可明显减轻缺血再灌注引起的脑水肿、脑梗死体积和细胞凋亡的程度,从而起到脑保护作用,为临床应用天麻治疗脑缺血提供了理论依据。  第二部分 天麻对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡相关基因表达的影响  目的:观察天麻对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响。  方法:采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,实验分为六组:将SD大鼠(250-280克雄性)随机分为6组,每组6只:假手术组(不给药);模型组给(生理盐水);天麻低剂量组(灌胃参考剂量0.35g/kg/d);天麻中剂量组(灌胃参考剂量0.70g/kg/d);天麻高剂量组(灌胃参考剂量1.40g/kg/d)(每天灌胃一次);尼莫地平组(灌胃参考剂量5mg/kg/d);缺血1小时,再灌注12小时、24小时、48小时、72小时;分别观察(1)缺血1小时,再灌注12小时、24小时、48小时、72小时;应用rt-PCR检测各实验组Bax、bcl-2、Caspase-3、XIAP的mRNA的表达;应用免疫组化检测各实验组Bax、bcl-2、Caspase-3、XIAP蛋白的表达;应用Western blotting法检测各实验组Bax、bcl-2、Caspase-3、XIAp蛋白的表达。  结果:(1)RT-PCR检测CIR后脑组织Bcl-2mRNA、BaxmRNA、Caspase-3mRNA、XIAPmRNA的表达,随再灌注时间的延长,表达增加,天麻各剂量组各时间点Bcl-2mRNA、XIAPmRNA表达均不同程度增强,BaxmRNA、Caspase-3mRNA表达均不同程度降低。与CIR组相比有显著性差异。(2)免疫组化检测CIR后脑组织Caspase-3、XIAP、bcl-2、bax蛋白的表达,随再灌注时间的延长,表达增加,天麻各剂量组各时间点Bcl-2、XIAP蛋白表达均不同程度增强,Bax、Caspase-3蛋白表达均不同程度降低。与CIR组相比有显著性差异。(3)Western blotting法检测CIR后脑组织Caspase-3、XIAP、bcl-2、bax蛋白的表达,随再灌注时间的延长,表达增加,天麻组各时间点Bcl-2、XIAP蛋白表达均不同程度增强,Bax、Caspase-3蛋白表达均不同程度降低。与CIR组相比有显著性差异。  结论:天麻抗凋亡机制可能与增加Bcl-2、XIAP阳性表达,降低Bax、Caspase-3阳性表达有关。
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