拟南芥WRKY8互作蛋白VQ10调控植物防御病原菌Botrytis cinerea的功能研究

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VQ蛋白家族是植物特有的蛋白家族,模式植物拟南芥中拥有34个成员。近期有限的研究表明,VQ蛋白在植物病原菌抵抗过程中具有重要作用,并与某些WRKY蛋白相互作用。但VQ蛋白在植物防御病原菌过程中的生物学功能和分子机制尚不明确,报道较少。本实验室的前期研究结果显示,WRKY8基因响应病原菌的刺激并参与调控植物抗病反应;前期的酵母双杂交实验证实VQ10蛋白与WRKY8蛋白相互作用。这些证据表明VQ10很有可能也参与对病原菌抗性的调控,因此在本论文中主要报道VQ10在植物抵抗病原体感染过程中的作用。  本研究发现,拟南芥VQ10蛋白与WRKY8转录因子在细胞核内相互作用,形成转录复合物;酵母双杂交实验表明,WRKY8的中间区段和VQ10的VQ域对它们之间的相互作用非常重要;进一步研究发现,VQ10与WRKY8的相互作用能够增强WRKY8的DNA结合活性。亚细胞定位实验分析发现,VQ10蛋白特异性地定位于细胞核中,表达模式分析表明VQ10基因主要在角果中表达。在病原菌诱导条件下的基因表达分析结果显示VQ10基因的表达受Botrytis cinerea的强烈诱导,几乎不受Pseudomonas syringae pv.Tomato的诱导表达;在激素诱导条件下的基因表达分析结果显示VQ10基因的表达受到水杨酸(Salicylic Acid,SA)的强烈诱导,受到茉莉酸(Jasmonate Acid,JA)及乙烯(Ethylene,ET)的抑制。进一步的表型分析结果显示,拟南芥VQ10基因突变后植物对B.Cinerea的抗性减弱,表现为B.cinerea入侵后叶坏死面积较大,抗性基因PDF1.2表达量明显降低,叶片中积累的病原菌较多。而超表达VQ10基因后的植株表型相反,对B.Cinerea的抗性增强,表现为B.cinerea入侵后叶坏死面积较小,抗性基因PLANT DEFENSIN1.2(PDF1.2)表达量明显提高,叶片中积累的病原菌较少。为了确定VQ10基因所处的抗病信号通路,检测了B.Cinerea处理后VQ10基因在各种抗病相关突变体背景下的表达,结果表明VQ10基因在SA信号突变体(npr1)及合成突变体(sid2)背景下显著下调,说明VQ10基因部分参与了SA介导的抗病信号途径。  拟南芥WRKY8互作蛋白VQ10调控植物防御病原菌Botrytis cinerea的功能研究  综上所述,本研究证实拟南芥VQ10正调控植物抗B.Cinerea的反应;并在蛋白水平上与WRKY8相互作用,增强WRKY8的转录活性。
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