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目的:本研究采用mRNA差异显示反转录聚合酶链式反应技术(DDRT-PCR)显示NSEE诱发的NIH小鼠前胃癌癌变不同时期的差异表达序列标签(expresssequencetags,ESTs),探索前胃癌发生和发展的分子机理。
方法:用N-亚硝基-肌氨酸乙酯(N-Nitrososarcosineethylester,简称NSEE)作为诱变剂建立NIH小鼠前胃癌不同癌变时期的动物模型。从给药第一天开始,在14d、28d、56d、77d和84d分五批处死小鼠,分别取前胃组织,一部分通过病理切片进行病理分型;另一部分待分型后进行后续实验,用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究不同病理时期差异表达的基因。采用反向Northern点杂交技术对分离得到的差异片段进行初步筛选,然后进行克隆与测序。用生物信息学方法对测序结果进行分析。
结果:得到25条差异片段,筛选后对其中的10条进行克隆测序并进行BLAST检索,发现有1个片段(ESC-10)与小鼠已知基因—剪接因子3b亚单位1(Sf3b1)的mRNA基因同源性达到100%,认为是Sf3b1的同源序列。其余9个差异片段中,有7个片段(ESC-1、ESC-2、ESC-5、ESC-6、ESC-7、ESC-8、ESC-9)分别与小鼠已有核酸数据库中的cDNA克隆RP23-14N22、RP23-233G16、RP24-113B3、RP23-78D16、RP23-114B10、RP24-548F24和RP23-366E1具有较高相似性,均在97%以上,可认为是小鼠己知片段,但对其功能和蛋白产物等的研究较少,仍需进一步的研究。另外2条序列(ESC-3和ESC-4)在小鼠已有的核酸数据库中未找到同源己知基因,可认为是小鼠新的表达序列标签(expresssequencetags,ESTs)。
结论:本研究首次通过实验发现Sf3b1在食管癌癌变各个时期差异表达的情况。小鼠剪接因子3b亚单位1(Sf3b1)的mRNA基因在正常组织(N级)中无表达(或弱表达),而在增生性病变(Ⅰ级)、癌前病变(Ⅱ级和Ⅲ级)、早期癌(Ⅳ级)和浸润癌(V级)中表达出现上调,提示其参与了小鼠前胃癌的发生发展及转移的过程,可能在细胞的增殖和转化机制中发挥一定作用。