目的通过建立DNA介导的基因转化技术,敲除马尔尼菲青霉（Penicillium marneffei, PM） HOG1基因,初步研究hog1基因缺陷株形态与功能的变化,探讨该基因在PM中的作用。为深入研究PM致病的分子机制提供技术平台,将有助于揭示PM致病的具体机制。方法以PM基因功能研究专用菌株SPM4（pryG-, niaD-）为实验菌株,提取DNA及RNA,设计引物扩增HOG1基因全长。通过生物信息学方法,查找到HOG1基因两侧的序列,设计引物通过融合PCR技术构建PM HOG1基因敲除载体,在此基础上制备SPM4原生质体,通过化学法将敲除载体转化入原生质体,培养,筛选阳性克隆,提取DNA；通过PCR方法验证以获得hog1基因缺失株。将得到的hog1基因缺失株与其母本菌株SPM4比较,观察其在高渗透压、过氧化氢存在下,以及温度变化等对生长及双相转换等的影响。结果PM的HOGl基因全长,全长2446BP,共有8个外显子,7个内含子,mRNA全长2046bp,编码区1035 bp,编码蛋白344氨基酸。序列比对还发现该基因与多个真菌的Hog1蛋白序列有同源性。比对分析氨基酸序列后发现其的功能域与烟曲霉的相似性最高,为96%。通过融合PCR构建了以尿嘧啶（pryG）为筛选标记的HOG1基因敲除载体,制备PM原生质体,通过化学法将敲除载体转化入原生质体,培养,在尿嘧啶缺陷培养基中生长筛选阳性转化子,进一步运用PCR方法获得同源重组子,获得5株hog1基因缺失株。初步功能研究显示PM hog1突变株在含4%NaCl的培养基上生长能力下降,但对PM抵抗过氧化氢杀伤、25℃菌丝相、37℃酵母相生长,及双相转化能力无影响。结论PM的HOG1基因与其它多种真菌同源性的Hog1蛋白序列有同源性,比对分析氨基酸序列后发现其的功能域与烟曲霉的相似性最高,为96%。通过化学方法建立了PM的DNA介导的基因转化及基因敲除技术,并成功替换HOG1基因,初步功能研究发现,与其母本SPM4比较,在含4%NaCl的培养基中hog1突变株生长能力减慢,提示PM的HOG1基因在中参与了PM对渗透压变化的调控,缺失该基因将导致PM对渗透压变化的适应能力减弱。因此,该基因可能是PM致病相关。