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稀有鮈鲫（Gobiocyprisrarus）作为一种小型鲤科鱼类，已成为我国一种新型理想的实验模式动物，但是关于稀有鮈鲫生殖细胞的发生和性腺分化的机制还不是很清楚，有关稀有鮈鲫deadend(dnd)基因的克隆、表达模式以及功能的研究至今未见报道。本研究首先克隆稀有鮈鲫dnd基因的保守片段以及全长序列，进行了序列的比对分析;其次研究了dnd基因在稀有鮈鲫各个组织以及胚胎不同发育时期的表达情况;同时合成了地高辛标记的RNA探针，通过胚胎整体原位杂交观察dnd基因在胚胎中的表达及迁移的情况;最后构建了pCS2+-dn重组质粒，进行dnddsRNA以及dndmRNA的体外转录，以期研究稀有鮈鲫dnd基因对生殖细胞发育的影响。通过dnd基因的研究提供鱼类生殖细胞新的标记基因，利于今后的基础和应用研究，为以dnd为目标的全雄鱼或不育转基因鱼的培育提供基础资料。 一、采用RT-PCR和SMARTerTMRACE-PCR扩增技术，得到了稀有鮈鲫dnd基因1718bp的全长cDNA序列，其中5非编码区80bp，3非编码区471bp，开放阅读框为1167bp，共编码388个氨基酸残基，含一个由73个氨基酸残基组成的RRM结构域。将稀有鮈鲫与代表性物种的Dnd氨基酸序列进行多重序列比对以及系统进化分析，结果发现，Dnd具有很强的保守性，除了特有的RRM结构域外，还包含5个保守结构域，1个N-末端区域和4个C-末端区域，其中RRM为主要的功能结构域。 二、运用RT-PCR技术，分析稀有鮈鲫dnd基因的表达模式。RT-PCR结果显示，dnd因特异性地在稀有鮈鲫的性腺中表达，并且dnd基因在卵巢中的表达量高于精巢中的表达量，但没有显著性的差异(P＞0.05)。推测，dnd基因在稀有鮈鲫性腺发育和分化过程中起重要的作用。在胚胎发育阶段，dnd基因在胚胎的整个发育过程中持续表达，从胚胎的合子期一直到囊胚期，dnd基因维持较稳定的高水平表达;从原肠胚期表达量有所下降，在出苗期达到了最低水平，并且合子期到囊胚期的表达较之后几个时期的表达差异极显著(P＜0.01)。推测，稀有鮈鲫的dnd基因是一个母源性基因，在整个胚胎发育以及PGCs的迁移过程中起着重要的作用。 三、合成地高辛标记的RNA探针，进行胚胎整体原位杂交。结果显示，稀有鮈鲫dndmRNA信号在胚胎2-细胞期的卵裂沟形成两个信号点，在4-细胞期的卵裂沟变成四个点，从3h开始，dndmRNA的信号向下迁移，4h、6h之后对齐分布在胚轴的两边，最终迁移进入性腺;其中在2-细胞到4h期间，稀有鮈鲫dnd基因的表达量较高，6h开始表达信号有所下降，验证了dnd基因在胚胎不同发育时期表达的RT-PCR结果，并且与稀有鮈鲫vasa基因的表达特点、表达位点以及在性腺中迁移的情况一致，说明了dnd基因为稀有鮈鲫生殖细胞特异性表达的基因，可能参与PGCs的迁移及配子的发生，在性腺发育和生殖细胞分化的过程中具有重要的作用。 四、构建pCS2+-dnd重组质粒，进行dnddsRNA以及dndmRNA的体外转录，以期研究稀有鮈鲫dnd基因对生殖细胞发育的影响。