论文部分内容阅读
酪蛋白糖巨肽(Casein Glycomacropeptide，CGMP)是一种具有多种生物活性的乳源小分子肽。CGMP除了良好的营养特性之外，还有提高智力发育、促益生菌增殖以及免疫调节等活性。结直肠癌(colorectal carcinoma，CRC)是人类常见的消化道恶性肿瘤之一，其发生发展和转移是一个由遗传和环境等诸多因素经过多步骤及内外因交互作用的结果。核转录因子-κB(Nuclear factor-κB，NF-κB)是广泛存在于哺乳动物细胞中的核转录因子，在60％～80％的结肠癌中都有所表达，约40％的结肠癌中NF-κB具有活性。激活的NF-κB调控了一系列的炎症靶基因，在细胞的周期、凋亡和代谢病理过程中发挥重要作用。本实验室在连续获得国家自然科学基金的资助下，系统地从CGMP对肠道免疫调控系统、肠道菌群变化以及和肠道炎症反应的相关性等方面进行了研究。证实CGMP具有抗炎活性，在一定程度上可以改善、缓解和治愈炎症性肠病(inflammatory bowel diseases，IBD)。进一步的研究CGMP对CRC中的NF-κB的信号通路的作用可为其抗炎活性提供更科学的理论依据，还可能成为治疗CRC的一条新途径。 本研究以结肠癌HT-29细胞为对象，MTT法测定CGMP的对细胞的抑制作用，以LPS刺激HT-29细胞采用免疫荧光法确定激活NF-κB信号通路，然后在利用WesternBlotting测定CGMP对活化后HT-29细胞的细胞核内p65和p-p65蛋白以及细胞全蛋白COX-2、iNOS和GST-π的表达，最后ELISA的方法测定CGMP干预后的细胞培养液中的炎症因子和促血管生成因子的表达，以探讨乳源CGMP改善结肠癌的作用机制。结果表明:(1) CGMP可呈时间依赖性显著地抑制HT-29细胞的增殖，(2)1μg/mlLPS激活NF-κB信号通路使p65的核移位达到最大程度;(3) CGMP均可不同程度降低LPS激活后HT-29细胞p65和p-p65蛋白的表达，以0.01、0.1μg/mL的CGMP抑制效果最好，这两组的蛋白表达量也极显著的低于正常对照组;证实了低浓度的CGMP（0.01、0.1μg/mL）也下调了NF-κB调控的COX-2、iNOS和GST-π的表达;(4)各浓度CGMP也不同程度的抑制了细胞分泌的炎症因子和促血管生成因子的表达。实验结论: CGMP具有调节NF-κB信号通路和改善结肠癌的作用，其机制为CGMP可通过有效的降低p65及p-p65的表达而抑制结肠癌HT-29细胞内NF-κB的激活，下调结肠癌中高度表达且由NF-κB直接调控的COX-2、iNOS和间接作用的GST-π以及炎症因子和促血管生成因子的表达。同时还可抑制结肠癌细胞的增殖，从而减缓炎症程度。