论文部分内容阅读
目的研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)对胃癌的发生和迁移的作用,并阐明其受体介导信号转导机理,为研究胃癌发病机制提供新的思路和理论依据。内容用LPA和LPC分别刺激胃癌细胞BGC-803,对照中分别加入LPA受体特异性拮抗剂Ki16425和Gi蛋白特异性抑制剂PTX及ERK抑制剂PD98059,用MTT比色法观察胃癌细胞BGC-803增殖,用Boyden chamber测定细胞迁移作用。蛋白印迹技术检测LPA、LPC对胃癌组织和细胞中ERKl/2的磷酸化作用,对照为Ki16425和PTX的抑制作用,从而确定LPA作用于胃癌细胞的信号通路。采用免疫组化技术分析胃癌组织中Autotaxin表达,采用实时荧光定量PCR技术分析Autotaxin及LPA受体基因的表达量,用检测酶产物吸光度值的方法检测Autotaxin的酶活性,通过RNA干扰实验确定Autotaxin对LPC-LPA过程的的影响。结果MTT检测结果显示LPA、LPC均能促进BGC-803细胞增殖与迁移,且Ki16425和PTX均能抑制它们的增殖作用。荧光定量RT-PCR结果表明,在BGC-8031细胞中,LPA1-4四个受体均有表达,其中LPA1受体的表达量远远高于其它几个受体。蛋白印迹实验结果表明,用LPA、LPC和EGF单独刺激BGC-803细胞均能使ERK1/2信号通路活化。与Ki16425同时作用和PTX预处理BGC-803细胞时,LPA和LPC诱导的p-ERK1/2水平明显降低,而EGF诱导的ERK1/2磷酸化水平未受影响。Autotaxin基因在胃癌组织和细胞中大量表达,并且显示出很高的磷脂酶D活性,使LPC转化为LPA。siRNA干扰ATX基因的表达,将会抑制LPC刺激的BGC-803细胞的增殖和迁移作用。结论1.ATX在胃癌细胞和组织中均有高表达,并有很高的磷脂酶D的活性。2.LPA在细胞外的主要来源是：由ATX水解LPC后产生LPA。3.胃癌细胞BGC-803中LPA促细胞增殖和迁移的信号转导途径是：LPC-Autotaxin-LPA-LPA1/3-Gi-ERK。4.我们研究提示：Autotaxin和LPA1/3受体是胃肿瘤潜在治疗靶位点。