灰树花发酵液多糖提取及其活性测定

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jorlin2008
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1、利用平板培养和液体培养比较了8个灰树花菌株。发现固体平板培养中,菌株的平均日生长速度为5.0~6.5mm/d,菌丝体均为白色,216菌株、270菌株和275菌株的菌丝生长量较慢,但是菌丝绒毡状,生长均匀,边缘整齐,菌丝致密。摇瓶培养表明,菌株间的菌体干重差别不大,粗多糖含量以270菌株和275菌株最高,分别为7.7mg/mL和7.8mg/mL。发酵罐测试表明:随着培养时间的延长,pH逐渐降低,最后维持在pH3~4,菌丝体生长量为20~22mg/ml,总糖测试表明270菌株和275菌株可以达到30mg/mL,其它几个菌株略低。   2、采用响应面分析中的Box-Behnken试验优化了灰树花胞内多糖提取条件,结果表明,实验范围内多糖最佳提取条件为提取温度92.53℃,浸提时间2.24h,水料比35.76∶1,在此条件下多糖的理论提取率为7.28%,验证值为7.15%。表明响应面法能够较好的分析提取温度、提取时间及料水比等多个因素对灰树花胞内多糖提取的影响作用,并且回归方程的预测值与试验值符合度较高。   3、研究了灰树花多糖的提取纯化方法。分别对胞内多糖提取液和胞外多糖提取液进行浓缩、除色素、脱蛋白处理,并利用乙醇进行分步醇析。实验表明,胞内多糖总产率为2.19g/L,胞外多糖总产率为1.68g/L,胞外多糖产率略低。通过对多糖组分进行SephadexG-100分子筛柱层析,分离到胞内多糖组分IP30-Ⅰ、IP60-Ⅰ、IP60-Ⅱ和IP83-Ⅱ,得到胞外多糖组分EP60-Ⅰ、EP60-Ⅱ和EP83-Ⅰ。   4、测试了灰树花胞内多糖对S180荷瘤昆明小鼠的抑瘤作用。荷瘤小鼠随机分为四组:低剂量多糖组(200mg/kg.d)、高剂量多糖组(500mg/kg.d)、环磷酰胺阳性对照组(20mg/kg.d)和生理盐水阴性对照组。给药10d后计算肿瘤抑制率。结果表明:与阴性对照组相比,低剂量多糖组和高剂量多糖组抑瘤率分别达到61.51%(P<0.01)和44.42%(P<0.01),环磷酰胺组抑瘤率为73.75%(P<0.01)。测试了灰树花多糖不同组分对肝癌Hep细胞的体外抑制试验,以蒸馏水为阴性对照组、以氟尿嘧啶为阳性对照组。结果表明:胞内多糖的抑制效果好于胞外多糖,其中最高可以达到抑制率66%。   5、测定了灰树花发酵液胞内多糖的单糖组份及其摩尔比。将胞内多糖IP30、IP30-Ⅰ、IP60、IP60-Ⅰ、IP60-Ⅱ分别水解为单糖,采用HPLC法测定其组成及摩尔比。结果表明:IP30含8种单糖,IP30-Ⅰ则由7种单糖组成;IP60含7种单糖,IP60-Ⅰ由6种单糖组成,IP60-Ⅱ则含4种单糖。5个多糖组份中,都含有甘露糖、葡萄糖、半乳糖,而且都以葡萄糖含量最多;除IP60-Ⅱ外其余4个组份中都含有1种10种标准单糖之外的未知糖,而且IP60和IP60-Ⅰ中含量多,仅次于葡萄糖。
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