【摘 要】
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牛白细胞粘附缺陷病(Bovine leukocyte adhesion deficiency,BLAD)是一种致死性遗传疾病.本研究就是根据BLAD牛CD18 mRNA编码序列383位碱基由A突变为G(A383G)而使该处的Taq
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牛白细胞粘附缺陷病(Bovine leukocyte adhesion deficiency,BLAD)是一种致死性遗传疾病<[1]>.本研究就是根据BLAD牛CD18 mRNA编码序列383位碱基由A突变为G(A383G)而使该处的Taq Ⅰ酶切位点消失的原理,设计了一对特异性引物,使PCR扩增片段长度为575bp,含有两个Taq Ⅰ酶切位点,其中一个为383位;扩增片段经Taq Ⅰ酶切后健康牛产生106 bp、199 bp、270bp 3个片段,BIAD牛产生199 bp、376bp 2个片段,而BLAD携带牛则出现106bp、199 bp、270bp和376 bp 4个片段.引物经BLAST软件分析表明具有良好的特异性.试验对采取的Holstein奶牛抗凝血样分离白细胞,然后提取白细胞总RNA,进行RT-PCR扩增,从而建立了RT-PCR扩增方法.在此基础上,对影响PCR扩增的引物浓度、退火温度、dNTP浓度等条件进行了优化,结果以引物浓度以7.5μmol/L、退火温度以56℃、dNTP浓度以0.0375 mmol/L时,PCR扩增结果较为理想.试验对我国黑龙江东部部部分地区的350头Holstein牛的白细胞进行RT-PCR扩增,然后用Taq Ⅰ酶切PCR产物结果350头Holstein牛中BLAD携带牛7头,其余均为健康牛,携带率为2.0%.
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