常用消毒剂对白斑综合症病毒(WSSV)的作用及病毒在宿主的感染增殖

来源 :国家海洋局第三海洋研究所 | 被引量 : 3次 | 上传用户:liyongrubylian
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对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus, WSSV)是线形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒属(Whispovirus)的唯一成员,是一种非包涵体的类杆状病毒,具有双链环状DNA,能感染对虾、螯虾等各种虾类。该病毒宿主范围广,传染力强,致死率高,是养殖虾类的主要病原。本文从常用消毒剂对WSSV的杀灭作用着手,探究实验室及养殖场的消毒方式。此外,我们通过口服途径感染WSSV,研究病毒最初侵染对虾消化系统的哪个组织或器官,并且研究了WSSV在宿主造血组织细胞中增殖情况及感染的病毒滴度。(1)消毒剂选择目前在水产养殖中常用的消毒剂有氯化物,碘化物,过氧化物和强氧化物等,较少有文献深入报道这些消毒剂是否对WSSV有杀灭作用及其灭活机制。本文中,我们选取了具有一定代表性的二氧化氯,碘三氧,过氧化氢和高锰酸钾处理病毒粒子,通过分析对病毒基因组DNA,病毒蛋白和病毒粒子感染性的影响,以确定能够杀灭WSSV的消毒剂的有效作用浓度及作用时间。我们发现病毒的基因组DNA以及病毒结构蛋白的损伤程度与病毒感染活性呈负相关,结果表明,二氧化氯的有效浓度为50ppm,作用时间为60min,能引起病毒结构蛋白的降解,并基本上使病毒的感染活性丧失。而高锰酸钾在25ppm的浓度下有效作用时间为15min,或在50ppm的浓度下有效作用时间为5min,几乎能完全降解病毒的结构蛋白和基因组DNA,而且病毒粒子完全失去感染活性。此外,碘三氧和过氧化氢浓度在250ppm以内,对WSSV没有消毒作用。根据实验结果,我们认为二氧化氯和高锰酸钾是适合作为灭活WSSV的消毒剂。(2)病毒在细胞内增殖时相通过荧光定量PCR的方法分析了WSSV在红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)造血组织细胞中的增殖时相,发现在感染后12~24h内,细胞中的病毒有一定量的增殖,36h反而有一定下降,一定量的病毒粒子释放到培养基中。在确定合适感染复数(MOI)的实验中,我们通过提取感染病毒24h的细胞中的总RNA,进行real-time RT-PCR,通过分析不同感染复数下病毒基因转录的情况,发现感染复数为MOI1000,可以达到较好的感染效果。(3)病毒最初入侵的器官用含WSSV的螯虾肌肉投喂健康对虾来模拟自然条件下WSSV经摄食而感染,在感染后24h内取不同的对虾组织或器官,通过荧光定量PCR的方法测定其病毒拷贝数,结果显示通过口服感染的病毒主要在胃部增殖。以前扫描电镜的结果也发现胃部能粘附更多的病毒粒子。为此,我们初步认为病毒粒子经对虾摄食后,主要入侵胃器官并增殖。
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