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目的从体内动物实验、体外细胞实验两方面探讨Nrf2-ARE信号通路在脑缺血后血管新生的分子机制及脑健片的干预研究。方法(1)体内研究以MCAO大鼠为动物模型,将SD大鼠随机分为假手术组、MCAO模型组、补阳还五汤组(灌胃：3.15g/kg)和脑健片组(灌胃：2.41g/kg)。各组给予相应处理后,在第1天,第3天,第7天三个时间点取海马进行检测,免疫组织化学法检测血浆Ⅷ因子相关抗原(vWF),测定微血管密度(MVD)。测定脑组织SOD活力(黄漂呤氧化酶法)、MDA含量(疏代巴比妥酸法)、GSH含量(酶标法)及GSH-Px活性(比色法)。采用Real-Time PCR和Western blot法检测大鼠海马组织中Nrf2.HO-1、γ-GCS基因及蛋白表达。(2)体外研究采用浓度(300μmol·L-1)的H202作用大鼠血管内皮细胞4h建立体外血管内皮细胞氧化应激模型,根据不同处理分成正常组、模型组、10%补阳还五汤含药血清组、5%脑健片含药血清组、10%脑健片含药血清组、20%脑健片含药血清组6组,采集细胞培养液进行检测,MTT法及流式细胞术检测血管内皮细胞增殖及调亡,测定细胞SOD活力(黄漂呤氧化酶法)、MDA含量(疏代巴比妥酸法)、GSH含量(酶标法)。采用Real-Time PCR和Western blot法检测大鼠海马组织中Nrf2、HO-1、γ-GCS基因及蛋白表达。结果(1)动物实验结果：假手术组vWF在微血管只有少量的阳性表达,模型组vWF阳性表达微血管在第1天时无明显差异,第3天时表达明显升高(p<0.05),随着动物生存时间延长,模型组vWF阳性表达呈现下降趋势。给药组与模型组表达规律基本一致,其中给药组第7天与模型组比较均有显著差异(P<0.05),给药组组间比较差异无显著性。各个时间点模型组与假手术组比,脑组织SOD含量、GSH含量、GSH-Px活性明显降低(P<0.01,P<0.05),MDA含量升高(P<0.05),各用药组与模型组比较,其中第3天SOD含量、GSH含量、GSH-Px活性与同时间点模型组比较差异有统计学意义(p<0.05),第7天MDA含量、GSH-Px活性与同时间点模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。 Real Time-PCR结果显示：假手术组Nrf2.HO-1及γ-GCSmRNA呈少量表达,各个时间点模型组Nrf2mRNA表达略高,但与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),第7天模型组HO-1mRNA,第1天模型组γ-GCSmRNA与同时间点假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05)。各给药组能不同程度上调Nrf2mRNA表达,其中Nrf2mRNA在第7天上调最明显与同时段模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05).HO.1mRNA和γ-GCSmRNA在第3天上调最明显,与同时段模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。各时间点各给药组之间比较差异无统计学意义(P>0.05). Western-blot结果显示：Nrf2蛋白定位于68KD,HO一1蛋白定位于32KD,γ-GCS蛋白定位于92KD,内参照物GAPDH定位于37KD,假手术组中Nrf2、HO-1及γ-GCS蛋白呈少量表达,模型组Nrf2蛋白表达水平第3天与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),模型组γ-GC S蛋白表达量升高,第1天、第3天表达最明显(p<0.05,P<0.01)。各给药组能不同程度上调Nrf2蛋白表达,其中在第1天及第7天上调最明显,与同时段模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。各给药组能不同程度上调HO-1蛋白表达,其中在第3天及第7天上调最明显,与同时段模型组比较差异具有统计学意义(p<0.05)。各给药组第3天能上调γ-GCS蛋白表达,与同时段模型组比较差异具有统计学意义(p<0.01,P<0.05)。(2)细胞实验结果：形态学、MTT及流式细胞术检测到10%脑健片含药血清处理组较5%脑健片含药血清处理组和20%脑健片含药血清处理组细胞损伤程度低,抑制凋亡的效果最明显。与正常组比较,缺氧组SOD,GSH含量明显降低(P<0.01),MDA含量显著升高(p<0.01)；与缺氧组比较,各给药组SOD, GSH含量明显升高(P<0.01),MDA含量显著降低(p<0.01),三组不同精简含药血清组中10%脑健片含药血清处理组抑制氧化应激反应效果最佳(P<0.05)。Real Time-PCR及Western-blot结果显示：模型组HO-1,Nrf2,γ-GCSmRNA及蛋白表达较正常组高,而用不同浓度脑健片含药血清处理后,能不同程度提高HO-1,Nrf2,γ-GCSmRNA及蛋白表达,其中10%脑健片含药血清处理组上调最明显(P<0.05)。结论：1.Nrf2-ARE通路在脑缺血缺氧损伤条件下早期被激活,Nrf2的高表达上调了其下游的HO-1,γ-GC S水平,提示Nrf2-ARE通路可能参与了脑缺血后内源性应激防御机制2.“益气祛瘀生新”为治则的脑健片能促进脑缺血后血管新生,这种对血管保护作用可能是通过提高抗氧化酶活性,降低脂质过氧化程度及激活Nrf2-ARE通路中Nrf2,HO-1,γ-GCS等靶基因的表达从而抑制氧化应激损伤来实现。3.10%脑健片含药血清可以显著减轻氧化应激造成血管内皮细胞的损伤,抑制细胞调亡,这一作用可能与抑制氧化应激反应及上调Nrf2-ARE通路表达有关。