实时荧光定量PCR是目前较为常用的一种验证基因表达稳定性的方法,为了获得更加准确可靠的分析结果,在进行qRT-PCR时常常需要合适的内参基因来验证和标准化目的基因,此类基因在所有的样品和处理中均能够稳定表达。目前关于甜瓜内参基因的研究很少,为了选取适用于甜瓜基因表达研究的内参基因,我们分别对10个候选内参基因在甜瓜不同发育期不同组织26个样本中的表达量和11候选内参基因在生物胁迫(霜霉病菌)和非生物胁迫(不同激素、热激/冷害、霜霉病菌/盐)27个样本中的表达量了分析。为了获得最适合用于甜瓜基因表达研究中的内参基因,利用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3种软件对候选内参基因的表达稳定性进行分析,研究发现所有候选内参基因的在不同样品中的表达稳定性均存在一定的变化。具体研究结果如下:1、本试验所用的是异硫氰酸胍RNA提取法,我们在试验过程中对提取方法进行了一定的改进,如:缩短水浴时间等,进而得到了完整性较好、无降解且纯度高的RNA,完全满足后续试验的要求。2、在甜瓜营养器官中,geNorm分析的结果显示,总样品、根、茎叶样品中表达最稳定的基因分别是(actin、actin3)、(actin、actin3)、(actin1、actin5);根据NormFinder的分析结果,actin3在营养器官总样品、根、茎、叶样品中均为表达最稳定的基因;Best Keeper的分析结果显示,在总样品、根、茎叶样品中表达最稳定的基因分别是actin3、actin3、actin2。综合考虑根样品中最适合的内参基因为actin3,而在茎叶样品中最合适的内参基因是actin1,营养器官总样品中最适合的内参基因为actin3。3、在甜瓜生殖器官中,3个软件的分析结果略有不同。geNorm分析的结果显示在总样品、雌雄花、果实种子样品中表达最稳定的内参基因分别是(actin、actin3)、(actin1、UBI-ep)、(actin、actin4);NormFinder分析结果表明在总样品、雌雄花、果实种子样品中基因actin3、actin3、CYC的表达最为稳定;根据BestKeeper的分析结果,actin3、actin、18s rRNA分别为生殖器官总样品、雌雄花、果实种子样品中最适合的内参基因。结合3种方法考虑,推荐actin3、actin、actin分别作为生殖器官总样品、雌雄花、果实种子样品研究的内参基因。4、在甜瓜生物和非生物胁迫处理中,geNorm分析的结果显示总样品、不同激素胁迫、高低温胁迫、霜霉病菌/盐胁迫中,表达最稳定的内参基因分别是(actin、actin3)、(actin、actin3)、(actin4、EFla)、(actin4、actin5);NormFinder分析结果显示在总样品、不同激素胁迫、高低温胁迫、霜霉病菌/盐胁迫中,表达最稳定的内参基因分别是TUA、actin5、actin4、TUA;BestKeeper的分析结果显示总样品、不同激素胁迫、高低温胁迫、霜霉病菌/盐胁迫中,表达最稳定的内参基因分别是actin5、actin1、actin、actin2,综合考虑在逆境胁迫下推荐使用的内参基因是actin3、actin4、CYC、TUA。5、综合考虑推荐actin3为总样品中的内参基因。