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鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis, ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious Laryngotracheitis Virus, ILTV)引起的急性呼吸道疾病。该病具有急性爆发和潜伏感染的特点,给养禽业造成巨大的经济损失。由于ILTV弱毒疫苗能引起潜伏感染,并且在鸡群中的传播会造成毒力返强,从而成为新的感染来源；因此,迫切需要研制安全、高效的新型ILT疫苗。本研究以马立克氏病毒(MDV) CVI988/Rispens疫苗毒株为载体,构建表达ILTV保护性抗原gB糖蛋白的重组病毒,并分别评价重组病毒对ILT和马立克氏病的免疫效果。本研究以CVI988/Rispens疫苗毒株基因组短独特区的sorf1和sorf2作为ILTV gB基因插入位点,以网状内皮增生症病毒(REV)的长末端重复序列(LTR)为启动子、绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,构建转移载体质粒pMDV-gB-GFP。用磷酸钙共沉淀法将pMDV-gB-GFP和CVI988/Rispens基因组DNA共转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,获得带有EGFP标志的重组病毒；经有限稀释法纯化、筛选,获得带有EGFP标志的重组病毒rMDV-gB-GFP。用Cre重组酶去除rMDV-gB-GFP的EGFP基因,得到重组病毒rMDV-gB。经PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot试验鉴定,证明重组病毒rMDV-gB基因组中插入了ILTV gB基因,并能表达ILTV gB糖蛋白。本研究评价了rMDV-gB对ILTV强毒株攻击的免疫保护效果。将90只1日龄SPF鸡随机分成4组：rMDV-gB免疫组、rMDV-gB与ILTV弱毒疫苗联合免疫组、ILTV弱毒疫苗免疫组、攻毒对照组。前两组的试验鸡1日龄时分别颈部皮下接种5000空斑形成单位(PFU)的rMDV-gB;第二组和第三组的试验鸡于21日龄时接种1羽份的ILTV弱毒疫苗；42日龄时,各组试验鸡均用105EID50/鸡的ILTV强毒株攻击。观察试验鸡的症状表现,并于攻毒后第10天进行剖检和病理组织学检查。结果显示,在ILTV强毒株攻击后,rMDV-gB免疫组的保护率为65%,而ILTV弱毒疫苗组的保护率为41%,rMDV-gB的保护效力明显高于ILTV弱毒疫苗。本研究还发现,在1日龄雏鸡接种rMDV-gB后,再于21日龄接种ILTV弱毒疫苗,并不能提高对ILTV强毒株攻击的保护作用；表明1日龄雏鸡接种rMDV-gB后就能建立起针对ILTV的有效免疫力。本研究还评价了rMDV-gB对MDV RB1B超强毒株攻击的免疫保护效果。将60只1日龄SPF鸡随机分为3个试验组：rMDV-gB免疫组、CV1988/Rispens免疫组、攻毒对照组,每组20只试验鸡；rMDV-gB免疫组和CVI988/Rispens免疫组的试验鸡分别于1日龄时颈皮下接种5000PFU/鸡的相应疫苗；7日龄时,所有试验鸡经腹腔接种500PFU/鸡的MDV RB1B超强毒株。连续观察90天,记录各试验组鸡的发病和死亡情况。经统计,攻毒对照组90%的鸡死于马立克氏病,而rMDV-gB免疫组和CVI988/Rispens疫苗组的保护率均为100%,表明rMDV-gB可对MDV超强毒株的攻击能产生足够的保护。