7-硼酸频那醇脂香豆素测定·OH、O2·-的荧光分析方法探讨

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目的:以7-硼酸频那醇脂香豆素为荧光探针,测定·OH、02·的含量,建立测定·OH、O2·-含量的荧光分析方法。方法:以单因素实验和响应面优化实验对7-硼酸频那醇脂香豆素测定·OH和O2·-的最佳酸度、最佳温度和最佳反应时间进行进一步的优化,初步确定7-硼酸频那醇脂香豆素测定-OH和O2·-的最佳实验条件;在其最佳实验条件下,分析7-硼酸频那醇脂香豆素与Fenton体系产生的-OH反应和7-硼酸频那醇脂香豆素与K02溶于二甲基亚枫(dimethyl sulfoxide, DMSO)中产生的O2·-反应的线性关系,确定实验方法的准确度、精密度、回收率和重现性;并用所建立的检测方法应用于检测VitC、真菌多糖及几种常见紫色果蔬对-OH和O2·-清除能力的测定。结果:7-硼酸频那醇脂香豆素与·OH反应的最佳实验条件为:使用pH7.5的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液,35℃浴2.25h,最大激发光波长为330nm,最大荧光波长为453nm;方法的精密度RSD<2.41%;回收率为96.35-101.32%,RSD<1.25%;重现性实验RSD<1.02%,与可见-紫外分光光度法比较,本方法测定Fenton体系产生的-OH在10-80μmol/L有良好的线性关系,R2=0.9921。7-硼酸频那醇脂香豆素与O2·-反应的最佳实验条件为:使用pH7.0的NaH2P04-Na2P04缓冲溶液,4O℃浴3h,最大激发光波长为330nm,最大荧光波长为453nm;方法的精密度RSD<2.22%;回收率为94.50-99.50%,RSD<1.8O%;重现性实验RSD<1.64%,与可见-紫外分光光度法比较,本方法测定KO2溶于DMSO中产生的O2·-在5-45μmol/L有良好的线性关系,R2=0.9892。建立的方法优于可见-紫外分光光度法,能在低浓度下测定抗氧化剂对-OH和O2·-的清除能力。结论:本研究建立了测定.OH、O2"-含量及抗氧化剂清除·OH、O2·-能力的荧光分析方法,方法灵敏度高、稳定性好,并且简便易行,能在低浓度下测定抗氧化剂对-OH、O2·-的清除能力,克服了可见-紫外分光光度法中有色物质产生的干扰,扩大了测定范围,为抗氧化研究中-OH、O2·的含量的测定及抗氧化剂的筛选提供了一种新的荧光分析方法。
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