天津地区婴幼儿诺如病毒感染的分子流行病学特征

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目的:1研究2008年8月至2009年7月,天津地区婴幼儿病毒性腹泻中诺病毒。(Norovirus, NV)的感染情况。2初步研究天津地区诺如病毒优势流行株的分子生物学特性。3初步探讨诺如病毒感染的主要临床特征,年龄及季节分布特征。4比较用于检测诺如病毒的两对引物的检出情况。方法:收集2008年8月至2009年7月天津儿童医院门诊腹泻患儿排除细菌性腹泻粪便标本。对收集的标本采用免疫胶体金法检测轮状病毒,对轮状病毒阴性标本用试剂Trisol提取病毒总RNA后,采用针对诺如病毒的两对特异引物(P289/P290和JV12Y/JV13I)进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增诺如病毒目的片段。并对部分诺如病毒阳性标本的PCR产物进行测序。将测序结果在Genbank中进行BLAST比较,使用Bioedit和DNAstar基因分析软件,将所测病毒基因序列与Genbank中的诺如病毒其它基因型及Genbank中的相近序列进行核苷酸序同源性比较,并绘制基因进化树。同时收集患儿的腹泻,呕吐,发热,粪便性状等相关临床资料。数据管理采用SPSS11.5进行统计分析,定性资料采用x2检验,定量资料采用t检验。结果:1天津地区2008年8月到2009年7月,在收集的540例粪便标本中NV检测为阳性的标本有174份,阳性率为32.22%。2测序的15株均属于GⅡ-4型。与世界NV流行趋势相同。所测序列中,序列TJC0801与2006年北京的Beijing208株同源性最高;序列TJC0802,TJC0806与2006年的荷兰Nijmegen115同源性最高;序列TJC0803与2007年韩国的Seou10534株同源性最高,序列TJC0804与2007年韩国的Seou10552,Seou10534同源性较高;序列TJC0805,TJC0901, TJC0902与2006年日本的Kumamoto5同源性较高;序列TJC0807与2007年韩国的Seou10552株,Seou10545株,2006年深圳的Shenzhen173-06株同源性较高;序列TJC0808与2007年北京的Beijing361株,Beijing310株同源性较高;序列TJC0809与2006年日本的Akital同源性较高;序列TJC0903,TJC0905与2007年北京的Beijing133株同源性较高;序列TJC0906与2007年的Beijing96株,Beijing10株同源性较高。除序列TJC0904外,其它14株核苷酸序列均于GⅡ-4/2006b相近,而TJC0904与2008年韩国Seoul0229株同源性较高,为重组病毒。3 NV检测阳性的患儿中出现呕吐的患儿为26例,占所有NV感染患儿的14.94%。发热9例,占NV检测阳性患儿的5.17%。粪便性状中蛋花样粪便84例,占48.28%,稀糊样粪便51例,占29.31%,稀水样粪便39例,占22.41%。腹泻平均持续4.49天。在检测的12个月中,2008年11月的检出率最高,为62.22%,其次为2009年2月,检出率为52.00%。2009年6月亦有小高峰,检出率为39.62%。2008年8月检出率最低,为12.50%。在NV检测阳性的患儿中,12-17月年龄组的患儿所占比例最高,为29.93%,其次为3-5月,9-11月年龄组,各占NV阳性患儿的18.97%。2岁以下患儿占87.36%。在本次检测中,男性患儿的检出率为32.94%,女性患儿的检出率为31.00%。差别无统计学意义。4检测NV的引物P289/290检出率为21.33%,引物JV12Y/JV13I的检出率为17.41%。二者差别有统计学意义。结论:2008年8月至2009年7月,天津地区婴幼儿病毒性腹泻中,诺如病毒是主要的病原体之一。主要流行的基因型为GⅡ-4型。主要感染2岁以下的婴幼儿。一年中各月均有NV阳性标本检出,其中11月为发病高峰。引物P289/290对NV的检出率高于引物JV12Y/JV13I.
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