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本研究以奶山羊乳腺上皮细胞(MECs)为目的细胞,利用细胞混合培养技术通过将奶山羊乳腺上皮细胞(MECs)与骨髓间充质干细胞(BMSCs)在不同培养时间、不同接种密度条件下混合培养,研究其对奶山羊MECs泌乳功能基因表达量的影响,并检测酪蛋白合成量以及细胞因子水平变化。同时在奶山羊乳腺上皮细胞(MECs)单纯培养与不同培养时间、不同接种密度条件下将奶山羊MECs和BMSCs混合培养时比较MECs的增殖分化与形态学变化等。因此通过以上研究,鉴于提高奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能基因表达量提供最佳的条件,从而为提高奶山羊乳品质和产奶量提供一定的理论基础。 本试验研究得出以下结论: 1、奶山羊MECs和BMSCs混合培养体系能够延迟MECs的凋亡时间,提高其增殖、分化和有助于细胞的贴壁率。 2、混合培养体系下不同培养时间和不同接种密度会影响MECs中SREBP、STAT5基因表达量,而对FABP3基因表达量没有影响。根据本试验,结合试验数据分析显示,共培养体系下奶山羊MECs与BMSCs按2:1的接种密度混合培养至72h时乳腺上皮细胞泌乳功能基因表达量为最高。 3、奶山羊MECs与BMSCs混合培养能提高MECs中酪蛋白合成量。在不同培养时间、不同接种密度条件下奶山羊乳腺上皮细胞与骨髓间充质干细胞按2:1的接种密度混合培养至1d时乳腺上皮细胞asl-酪蛋白合成量为最高,而培养至3d时乳腺上皮细胞K-酪蛋白、β-酪蛋白合成量最高。 4、奶山羊乳腺上皮细胞与骨髓间充质干细胞混合培养可以促进混合培养体系中bFGF、HGF、EGF细胞因子分泌量,而TGF-α和TGF-β细胞因子的分泌量被抑制,当奶山羊MECs与BMSCs按2:1的接种密度混合培养至72h时细胞因子分泌水平最理想。