自噬在熊果酸抑制血管内皮细胞增殖中的作用

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zuoshuqiong
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目的:研究自噬在熊果酸(Ursolic acid,UA)抑制人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖中的作用。方法:体外培养HUVECs,采用不同浓度的熊果酸和自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA,)与熊果酸联合处理。运用MTT法检测熊果酸对HUVECs增殖的抑制作用及其联合3-MA处理细胞后细胞存活状态的变化;在透射电镜下观察熊果酸作用前后HUVECs结构的改变;微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associatedprotein1light chain3, LC3)免疫荧光和流式细胞术检测熊果酸对HUVECs自噬水平的影响;单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)荧光染色法观察熊果酸对HUVECs自噬泡的影响;Westernblotting检测LC3及自噬相关蛋白Beclin-1蛋白的表达情况;RT-PCR检测LC3及Beclin-1转录水平的变化;流式细胞术检测HUVECs经熊果酸和3-MA与熊果酸联合处理后凋亡率的变化。结果:随着熊果酸作用于HUVECs剂量的增加细胞的生长抑制程度及死亡程度也逐渐的增强;熊果酸抑制HUVECs生长增值36h的半数作用剂量为20μmol/L;HUVECs经熊果酸处理后透射电镜及MDC染色均显示:细胞浆中自噬相关形态的数量具有明显上升的趋势;细胞免疫荧光法检测显示熊果酸处理HUVECs组LC3阳性细胞数较对照组明显增强且流式细胞术检测显示熊果酸处理HUVECs后细胞的荧光强度与正常细胞培养组相比明显增强; HUVECs经熊果酸处理后可上调LC3及Beclin-1的蛋白水平及mRNA的转录水平;3-MA与熊果酸联合作用后,HUVECs受到的增殖抑制明显高于熊果酸单独作用,且其凋亡率上升明显。结论:熊果酸抑制人脐静脉血管内皮细胞生长增殖,在这个过程中自噬现象被激活,自噬在此过程中对HUVECs起保护作用。自噬抑制剂3-MA能够增强熊果酸抑制HUVECs生长增殖的作用并且促进熊果酸诱导HUVECs发生凋亡。
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