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目的:对生地黄药效及血清物质进行研究,通过比较生地黄药材,正常血清,阴虚、血热模型动物含药血清HPLC色谱图的差异,探讨其清热凉血,养阴生津的物质基础。 方法: (1)生地黄HPLC色谱研究 采用高效液相色谱法建立生地黄HPLC色谱图。色谱条件:以DikmaPlatisilC18柱为分析柱,275nm为检测波长,乙腈与0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温为30℃。 (2)生地黄对阴虚大鼠模型的影响 灌胃甲状腺素片复制阴虚大鼠模型,观察生地黄对阴虚模型大鼠的影响。实验周期28天,观察造模后各组大鼠行为表现,体重,体温,检测血清T3、T4、Cort含量,取各组大鼠肾上腺,甲状腺,进行病理观察。 (3)生地黄对血热出血大鼠模型的影响 腹腔注射内毒素及皮下注射酵母复制血热出血大鼠模型,观察生地黄对血热出血模型大鼠的影响。观察造模后各组大鼠行为表现,体温,检测凝血四项指标,取各组大鼠肺、肝、肾进行病理观察。 (4)生地黄含药血清HPLC色谱研究 建立各组生地黄含药血清HPLC色谱图。比较生地黄药材及含药血清,空白血清HPLC色谱图的差异,探讨生地黄滋阴和清热凉血功效的物质基础。 结果: (1)建立了生地黄HPLC色谱图,以5-羟甲基糠醛为参照峰,确定9个共有峰;通过方法学验证,精密度、稳定性、重复性实验中相对峰面积和相对保留时间RSD均小于5%,表明样品溶液在24h内稳定性良好,系统重复性、仪器精密度等均良好;通过相似度评价,比较了五批生地黄药材的相似度都在0.86以上,表明生地黄质量均一,稳定。 (2)对阴虚大鼠模型的影响:造模后,模型组大鼠出现皮毛疏松无光泽,易被激怒等现象。与正常组比较,模型组大鼠T3、Cort升高(P<0.05),体重增长缓慢,体温升高,甲状腺及肾上腺出现明显病理改变。经生地黄及六味地黄丸治疗后,各组T3、Cort均显著降低(P<0.05),体重增长加快,体温降低,脏器病变明显减轻。 (3)对血热出血大鼠模型的影响:造模后,模型组大鼠出现自发活动减少,进食减少,皮毛疏松等现象。与正常组比较,模型组大鼠APTT延长;PT延长、FIB增加(P<0.05),TT缩短(P<0.05),基础体温升高,肺、肝、肾均出现明显的病理改变。经生地黄治疗后FIB减少,TT延长,体温降低,大鼠脏器病变减轻。 (4)阴虚实验生地黄血清HPLC色谱研究中,发现生地黄高、低剂量组及六味地黄丸组血清均在相同保留时间出现了一个新的色谱峰(3号峰),血清中1、4号峰峰面积发生了变化;血热实验生地黄血清HPLC色谱研究中,发现生地黄给药组血清中出现了一个新的色谱峰(2号峰),血清中1号峰峰面积发生了变化。 结论:建立了生地黄HPLC色谱图,为进一步开展研究奠定了基础。在生地黄药效实验中,初步证实了生地黄及生地黄多糖的养阴功效,生地黄清热凉血的功效。生地黄养阴作用的物质基础可能和生地黄多糖、5-羟甲基-2-糠酸有关,其作用机制可能与对血清中1、4号峰峰面积的调节有关。生地黄清热凉血作用的物质基础可能和血热血清中2号峰有关,其作用机制可能与对血清中1号峰峰面积的调节有关。生地黄药效物质基础可能和生地黄多糖、5-羟甲基-2-糠酸及血热血清中2号峰有关,可能是通过对血清中固有峰峰面积的调节发挥治疗作用的。