小类泛素修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO)是近年发现的类泛素修饰蛋白,可通过异肽键共价连接到靶蛋白上,影响靶蛋白的生物学功能如细胞内定位、稳定性及与其它生物大分子的相互作用。在人中发现了四个SUMO亚型,分别是SUMO-1、SUMO-2、SUMO-3、SUMO-4,其中SUMO-2/3的活性形式具有97％的同源性。为了研究人的SUMO化修饰对蛋白质功能的影响,本文分别对人的SUMO-1、SUMO-2和SUMO-4进行了表达纯化并制备其多克隆抗体,主要研究结果如下： 本实验用pET28a(+)作为载体构建了人SUMO4的原核表达质粒pET28a-hSUMO4。利用本室保存的pET28a-hSUMO1、pET28a-hSUMO2和本文构建的pET28a-hSUMO4分别转化大肠杆菌BL21(DE3),优化了表达重组SUMO-1、SUMO-2、SUMO-4的诱导条件。SUMO-1和SUMO-2诱导条件相同：IPTG浓度为0.1 mmol/L,于37℃诱导4 h。SUMO-4诱导IPTG浓度为0.5mmol/L,于37℃诱导8 h。在此基础上,诱导表达了人重组SUMO-1,SUMO-2和SUMO-4蛋白,利用不同的纯化方法得到高纯度的变性和非变性的人重组SUMO-1,SUMO-2和SUMO-4蛋白。 以纯化的变性和非变性人重组SUMO-1、SUMO-2和SUMO-4蛋白为抗原免疫新西兰兔。利用ELISA法测定抗血清效价,所制备的抗体在稀释10000倍时仍可检测抗原。Western Blot法检测所制备的抗体,证实所制备的抗体具有高特异性。 本文所获得的效价高,特异性好的抗体,为后续的SUMO化修饰靶蛋白的鉴定及SUMO化修饰的生物学功能研究等工作奠定了坚实的基础。